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DNA 修復(fù)混合液 30 次保存

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更新時間:2017-07-17 13:20:03瀏覽次數(shù):129次

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DNA 修復(fù)混合液 30 次保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

DNA 修復(fù)混合液 30 次保存詳細(xì)說明書:

DNA 修復(fù)混合液 30 次保存產(chǎn)品及特點:
易錯 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
DNA 修復(fù)混合液 30 次保存變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95。 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
DNA 修復(fù)混合液 30 次保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測,一般實驗中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時間退火沒有必要。
DNA 修復(fù)混合液 30 次保存使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯 PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
16-phenyl tetranor Prostaglandin E2 10 mg     9-oxo-11alpha。,15S-dihydroxy-16-phenyl-1718,1920-tetranor-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; 16-phenyl tetranor PGE2; 16-phenyl tetranor Prostaglandin E2

Edrophonium chloride 250 mg     Enlon|Tensilon; N-ethyl-3-hydroxy-N,N-dimethyl-benzenaminium, monochloride

無水*(5KG     Sodium Phosphate, Dibasic, Anhydrous ACS Grade; Cas 7558-79-4 Formula: Na2HPO4; Formula Weight: 141.96

NSC 87877 100 mg     8-hydroxy-7-[2-6-sulfo-2-naphthalenyldiazenyl]-5-inoneolinesulfonic acid; NSC 87877

Dihydrorhodamine 123 5 mg     2-3,6-diamino-9H-xanthen-9-yl-benzoic acid methyl ester; DHR; Dihydrorhodamine 123

POE 20 sorbitan monooleate Polyethylene glycol sorbitan monooleate, Polyoxyethylenesorbitan monooleate Polysorbate 80     Tween 80, MegaPure Detergent, 10% Solution
DMSO Assay Reagent 3 ml     DMSO Assay Reagent

SureLight P3 5 mg     SureLight P3

cis-trismethoxy Resveratrol 100 mg     13-dimethoxy-5-[1Z-2-4-methoxyphenylethenyl]-benzene; cis-Trimethoxy Stilbene cis-trismethoxy Resveratrol

25I-NBOH hydrochloride 10 mg     2;C-I-NBOH; 2-(((4-iodo-2,5-dimethoxyphenethylaminomethylphenol, monohydrochloride

XLR11 6-hydroxyindole metabolite 1 mg     1-5-fluoropentyl-6-hydroxy-1H-indol-3-yl)(2,2,3,3-tetramethylcyclopropylmethanone; 5-fluoro  6-hydroxyindole metabolite XLR11 6-hydroxyindole metabolite

DiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 25 kDa     DiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 25 kDa
Arachidonic Acid metxyl ester-d8 5 mg     5Z,8Z11Z,14Z-eicosatetraenoic-5,6,8,911,1214,15-d8 acid metxyl ester; metxyl Arachidonate-d8; Arachidonic Acid metxyl ester-d8

GSK-LSD1 xy7nochloride 5 mg     N-[1R,2S-2-pxenylcyclopropyl]-4-piperidinamine, dixy7nochloride

ICG-Sulfo-OSu     ICG-Sulfo-OSu

5-chloro AB-PINACA 10 mg     N-1-amino-3-metxyl-1-oxobutan-2-yl-1-5-chloropentyl-1H-indazole-3-carboxamide; 5-chloro AB-PINACA

17-Octadecynoic Acid 1 mg     17-octadecynoic acid Alk-16|17-ODYA; 17-Octadecynoic Acid

34’,5,7-Tetraxy7noxyflavone, 3,5,7-Trixy7noxy-2-4-xy7noxypxenyl-4H-1-benzopyran-4-one, Robigenin     Kaempferol
-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基250g用于糞鏈球菌的純化培養(yǎng)

沙氏葡萄糖瓊脂 Sabourauds Glucose Agar 用于化妝品中白色念球菌分離培養(yǎng)

肉浸液瓊脂 Meat Infusion Agar 250 一般細(xì)菌培養(yǎng)

膽鹽七葉苷瓊脂250用于腸球菌和腸道致病菌的分離培養(yǎng)(Acumedia方法)incubationmedia膽鹽七葉苷瓊脂250用于腸球菌和腸道致病菌的分離培養(yǎng)(Acumedia方法)

衛(wèi)矛醇半固體瓊脂 10 生化培養(yǎng)基,用于細(xì)菌衛(wèi)予醇發(fā)酵試驗(SN標(biāo)準(zhǔn))
MaconkeyAgar(withoutsalt)

Maximum Recovery Diluent 大恢復(fù)稀釋液 1.12535.0500 MERCK默克 incubation media Maximum Recovery Diluent 大恢復(fù)稀釋液 1.12535.0500 MERCK默克

緩沖-甘油溶液 250g 用于樣品的保存。(GB 4789.13-2010)

胎兒骨髓間質(zhì)干細(xì)胞*培養(yǎng)基Fetalbonemarrowmesenchymalstemcellsincompletemed
DNA 修復(fù)混合液 30 次保存改良亞鹽瓊脂250g用于嗜熱菌芽孢(需氧芽孢總數(shù),平酸芽孢和厭氧芽孢)的分離培養(yǎng)和計數(shù)(SN標(biāo)準(zhǔn))

Argininebroth

ITC 肉湯 ITC Broth 250 用于分離培養(yǎng)耶爾森氏菌(ISO方法)

金氏B培養(yǎng)基250g/瓶用于綠膿桿菌產(chǎn)熒光鑒定,每培養(yǎng)基中添加incubationmedia金氏B培養(yǎng)基250g/瓶用于綠膿桿菌產(chǎn)熒光鑒定,每培養(yǎng)基中添加1702

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