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胚胎裂解液1mL運(yùn)輸

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更新時(shí)間:2017-07-17 14:16:23瀏覽次數(shù):193次

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胚胎裂解液1mL運(yùn)輸是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

胚胎裂解液1mL運(yùn)輸使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見(jiàn)下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見(jiàn)注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
胚胎裂解液1mL運(yùn)輸產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專(zhuān)門(mén)為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開(kāi)發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見(jiàn)使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
胚胎裂解液1mL運(yùn)輸DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過(guò)低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒(méi)有必要。
胚胎裂解液1mL運(yùn)輸詳細(xì)說(shuō)明書(shū):

11-deoxy Prostaglandin F1β 1 mg     9。beta。,15S-dihydroxy-prost-13E-en-1-oic acid; 9β,11-deoxy PGF1α|11-deoxy PGF1β; 11-deoxy Prostaglandin F1β

25B-NBF hydrochloride 5 mg     2C-B-NBF; 4-bromo-N-[2-fluorophenylmethyl]-2,5-dimethoxy-benzeneethanamine, monohydrochloride

泊咯沙姆188(普朗尼克 F68)(100GM     Poloxamer 188 Pluronic F68 ), 9003-11-6; MW 8400 Pluronic F68

BMPO 10 mg     3,4-dihydro-2-methyl-11-dimethylethyl ester-2H-pyrrole-2-carboxylic acid-1-oxide; BocMPO BMPO

Carnosol 5 mg     1,34,9,1010aS-hexahydro-5,6-dihydroxy-11-dimethyl-7-isopropyl-2H-9S,4aR-epoxymethanophenanthren-12-one; Carnosol

2S-2-[2-Indan-5-yloxy-9-11-biphenyl-4-ylmethyl-9H-purin-6-ylamino]-3-phenyl-propan-1-ol     QS11
ALT Assay Buffer 10X 1 ea     ALT Assay Buffer 10X

斯普利特麻一辛     Splitomicin 5 mg

ethyl-24-dimethyl-Thiazole-5-Carboxylate 100 mg     2,4-dimethyl-5-thiazolecarboxylic acid, ethyl ester ethyl-2,4-dimethyl-Thiazole-5-Carboxylate

Zinquin ethyl ester 1 mg     2-[[2-methyl-8-[[4-methylphenylsulfonyl]amino]-6-quinolinyl]oxy]-acetic acid, ethyl ester

G-36 5 mg     4S-rel-4-6-bromo-13-benzodioxol-5-yl-3aR,45,9bS-tetrahydro-8-1-methylethyl-3H-cyclopenta[c] G-36

13,14-dihydro-15-keto Prostaglandin A2 Lipid Maps MS Standard (50 mg)     13,14-dh-15-k PGA2, 13,14-dihydro-15-keto Prostaglandin A2 Lipid Maps MS Standard, 9,15-dioxo-prosta-5Z,1-dien-1-oic acid
384-Well Solid Plate black 5 ea     384-Well Solid Plate black

Erythromycin     Ak-Mycin|Eryc|NSC 55929|Staticin; erythromycin

yenine 3一元酸 [相當(dāng)于Cy3]     yenine 3 monoacid [equivalent to Cy3 acid]

MK 2206 xy7nochloride 5 mg     8-[4-1-aminocyclobutylpxenyl]-9-pxenyl-1,2,4-triazolo[3,4-f][1,6]naphthyridin-32H-one, dixy7nochloride

2-xy7noxymyristic Acid 10 mg     2-xy7noxytetradecanoic acid 2-xy7noxymyristic Acid

3,5-Bis[4-metxylpxenylmetxylene]-4-piperidone xy7nochloride     DUB Inhibitor NSC-632839
GN增菌液2350g用于革蘭氏陰性菌的選擇性培養(yǎng),特別是志賀氏菌和沙門(mén)氏菌的增菌培養(yǎng)(GB/T4789.28-20034..

西紅柿汁瓊脂 (CM0113) Oxoid incubation media 西紅柿汁瓊脂 (CM0113) Oxoid

蕁麻青霉 模式菌株 /

22gar

煌綠瓊脂培養(yǎng)基 250g 用于沙門(mén)氏菌(除傷*和志賀氏菌外)分離培養(yǎng)新生霉素/*5使用前,每支加入HB4incubationmedia新生霉素/*5使用前,每支加入HB4153

D/E中和肉湯 250g 用于衛(wèi)生環(huán)境中微生物培養(yǎng)
胚胎裂解液1mL運(yùn)輸BSSA瓊脂培養(yǎng)基250g用于果汁中嗜酸耐熱菌的檢測(cè)。

50300 乳糖 BR 500g incubation media 50300 乳糖 BR 500g

海蘇特氏菌 細(xì)菌肥料 /

SuperBroth

霉菌培養(yǎng)基(含瓊脂水*) 250g 用于霉菌的分離培養(yǎng)。

胚胎裂解液1mL運(yùn)輸變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過(guò) 95。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過(guò)高則引物 不能與模板牢固結(jié)合

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