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平滑肌細胞生長因子5mL操作步驟

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更新時間:2017-07-20 08:56:02瀏覽次數(shù):135次

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平滑肌細胞生長因子5mL操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

平滑肌細胞生長因子5mL操作步驟對于培養(yǎng)細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
平滑肌細胞生長因子5mL操作步驟產(chǎn)品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準(zhǔn)備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質(zhì)的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
平滑肌細胞生長因子5mL操作步驟詳細說明書:

平滑肌細胞生長因子5mL操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
DEAE纖維素DE-235毫升

(蛋白酶K)

β-甲基吲哚,英文名或英文縮寫:3-metxylindole,級別:HPLC級,規(guī)格:25

5-基糠全 5-Mqthyl-2-furcldqhydq;5-Mqthylfurfurcl;5-Mqthylfurcldqhydq;5-Mqthyl-2-furcnccrboxcldqhydq;2-ForMyl-5-Mqthylfurcn 60-0-0

脂多糖shēng huà shì jì容量:RT5
糖發(fā)酵基礎(chǔ)肉湯25RT,避光

51963-61-2腺苷-5-三磷酸二鈉鹽(-20)Adenosine 5'-triphosphate diwo7ium salt

2,8-二甲基500

2-叔丁基醌 2-tert-Butylanthraquinone,98% 84-47-9 25G 通用試劑

富勒烯C70 Fullerene C70,99% 115383-22-7 250MG 通用試劑
AGAROSEI/TBEBLEND2.0%瓊脂糖 - TBE 混合物 2.0%生物技術(shù)級100GRT

13593-03-8氧化喹硫磷inonealphos

5-metxyl-1-benzothiopxene-2-carboxylic acid 1505-62-0

鄰苯二二丙酯 Ethyl 4-pyridylacetate,97% 131-16-8 5ML 通用試劑

硅醋鹽 Nc
NA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細胞裂解液 (陽性對照)

人浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細胞;CCD-1095Sk

CL-0319B16-F10(小鼠皮膚黑色素瘤細胞)5×106cells/瓶×2

RAW264.7細胞,單核細胞-巨噬細胞 人單核細胞白血病細胞,THP-1細胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0923

293A (人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2

FCGR3A Others Human CD16a / FCGR3A 人細胞裂解液 (陽性對照)
人浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細胞;CCD-1095Sk

NA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細胞裂解液 (陽性對照)

CL-0319B16-F10(小鼠皮膚黑色素瘤細胞)5×106cells/瓶×2

RAW264.7細胞,單核細胞-巨噬細胞 人單核細胞白血病細胞,THP-1細胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0923

293A (人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2

FCGR3A Others Human CD16a / FCGR3A 人細胞裂解液 (陽性對照)
平滑肌細胞生長因子5mL操作步驟293來源病毒包裝細胞;ΦA-GP 人成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL

人癌細胞;SK-BR-3

CD59A Others Mouse 小鼠 CD59a / MAC-IP 人細胞裂解液 (陽性對照)

95-D人高轉(zhuǎn)移肺癌細胞 Human high metastatic lung cancer cell line 95-D RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

SERPINA12 Protein Human 重組人 Vaspin / SerpinA12 蛋白 (His 標(biāo)簽)

MJ(懸浮) 淋巴瘤

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