Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )1mg操作步驟詳細說明書：

Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )1mg操作步驟產品及特點：
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質的主要方法，但是單獨配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開發(fā)了本產品。它具有下列特點:
1. 一站式，即開即用，用戶不需單獨準備各種成分，十分方便。
2. 安全，將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活，分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE，滿足分離各種大小不同的蛋白質的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液，由于其含有染料，制備的濃縮膠呈藍色，便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )1mg操作步驟對于組織樣品：
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內加入 PMSF， 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解 液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )1mg操作步驟對于培養(yǎng)細胞樣品：
1. 融解 RIPA 裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內加入 PMSF， 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后，細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細胞/管， 然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。 注意：通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高 可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
鈹試劑II25克RT

(四甲基聯(lián)本胺)

鍶shēng huà shì jì容量：25克

4-氧基本醋;隊氧基本醋 4-Mqthoxyphqnylccqtic ccid;HoMocnisic ccid;p-Mqthoxy-α-toluic ccid 104-01-8

亮綠乳糖培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：1米
四正丁基化100克

556-27-4蒜酸Alliin

3-chloro-4-fluoro-1-benzothiopxene-2-carboxylic acid 588676-90-8

氫化奎寧 Hydroquinine,98% 522-66-7 1G 表面活性劑

二本基酰安 N,N-DIPHqNYLFORMcMIDq 607-00-1
Amyloglucosidasefromaspergillusniger糖化*5克生物技術級，6000u/mg

11119-67-8Dowex 508 離子交換樹脂DOWEX(R) 50 8

Phosphoramidondiwo7iumsalt嶙米酮5毫克超純，90%

2,4,6-三基三嗪 2,4,6-Tris(2-pyridyl)-s-tri 3682-35-7 1G 通用試劑

檸檬酸鉀 Potassium citrate tribasic monohydrate... 6100-5-6 1
小鼠星形膠質細胞(MA)(5×105)

人牙齦成纖維細胞總RNAHGF tRNA

敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21

小鼠肺腺癌低轉移細胞(綠色熒光蛋白標記);LA1-GFP 小鼠視網(wǎng)膜muller細胞*培養(yǎng)基 100mL

hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細胞 Human

CPA1 Others Human 人 Carboxypeptidase-A1 / CPA1 人細胞裂解液 (陽性對照)
人牙齦成纖維細胞總RNAHGF tRNA

小鼠星形膠質細胞(MA)(5×105)

敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21

小鼠肺腺癌低轉移細胞(綠色熒光蛋白標記);LA1-GFP 小鼠視網(wǎng)膜muller細胞*培養(yǎng)基 100mL

hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細胞 Human

CPA1 Others Human 人 Carboxypeptidase-A1 / CPA1 人細胞裂解液 (陽性對照)
Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )1mg操作步驟ICAM1 Others Mouse 小鼠 ICAM-1 / CD54 人細胞裂解液 (陽性對照)

小鼠漿細胞瘤;MPC-11

EPHB3 Others Human 人 EphB3 / HEK2 (aa 585-998) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

CSC, 小鼠心肌細胞 人小腸頸部表皮樣癌細胞，Ca Ski細胞 F81(貓腎細胞)

人導管瘤細胞;UACC812

Hela, 人細胞系