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elisa定量檢測(cè)試劑盒操作步驟如下

時(shí)間:2017/9/22閱讀:218
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elisa定量檢測(cè)試劑盒操作步驟如下:
⑴將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原:洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
⑵加稀釋的受檢血清:其中的特異抗體與抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體。其他抗體及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合,在洗滌過(guò)程中被洗去。
⑶加酶標(biāo)抗抗體:與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合,從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測(cè)人對(duì)某種疾病的抗體,可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體。
⑷加底物顯色:顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。
本法主要用于對(duì)病原體抗體的檢測(cè)而進(jìn)行傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測(cè)相應(yīng)抗體的方法。
間接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度。雖然有時(shí)用粗提抗原包被也能取得實(shí)際有效的結(jié)果,但應(yīng)盡可能予以純化,以提高試驗(yàn)的特異性。特別應(yīng)注意除去能與一般健康人血清發(fā)生反應(yīng)的雜質(zhì),例如以E.Coli為工程酶的重組抗原,如其中含有E.Coli成份,很可能與受過(guò)E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗體發(fā)生反應(yīng)??乖幸膊荒芎信c酶標(biāo)抗人Ig反應(yīng)的物質(zhì),例如來(lái)自人血漿或人體組織的抗原,如不將其中的Ig去除,試驗(yàn)中也發(fā)生假陽(yáng)性反應(yīng)。另外如抗原中含有無(wú)關(guān)蛋白,也會(huì)因競(jìng)爭(zhēng)吸附而影響包被效果。
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