其他類(lèi)elisa定量檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)技巧
（1）間接法和夾心法
這類(lèi)反響的定性成果能夠用肉眼判別。目視標(biāo)本也無(wú)色或近于無(wú)色者判為陰性，顯色明晰者為陽(yáng)性。但在ELSIA中，正常人血清反響后?？沙尸F(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因試劑的構(gòu)成和試驗(yàn)的條件不一樣而異，因而試驗(yàn)中有必要加測(cè)陰性對(duì)照。陰性對(duì)照的構(gòu)成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類(lèi)似物。在用肉眼判別成果時(shí)，更宜用顯色深于陰性對(duì)照作為標(biāo)本陽(yáng)性的目標(biāo)。
目視法簡(jiǎn)捷明晰，但頗具主觀性。在條件許可下，應(yīng)該用比色計(jì)測(cè)定吸光值，這么能夠得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本（sample，S）、陽(yáng)性對(duì)照（P）、和陰性對(duì)照（N）的吸光值，然后進(jìn)行核算。核算辦法有多種，大致可分為陽(yáng)性斷定值法和標(biāo)本與陰性對(duì)照比值法兩類(lèi)。
a．陽(yáng)性斷定值
陽(yáng)性斷定值（cut-off value）通常為陰性對(duì)照A值加上一個(gè)特定的常數(shù)，以此作為判別成果陽(yáng)性或陰性的規(guī)范。
TSZelisa試劑盒用此法判別成果請(qǐng)求試驗(yàn)條件十分穩(wěn)定，試劑的制備有必要規(guī)范化，陽(yáng)性和陰性的對(duì)照品應(yīng)契合必定的規(guī)范，須配用精密的儀器，并嚴(yán)厲按規(guī)則操作。陽(yáng)性斷定值公式中的常數(shù)是在這特定的體系中經(jīng)過(guò)對(duì)很多標(biāo)本的試驗(yàn)查看而得到的?，F(xiàn)舉某種查看HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿，陽(yáng)性對(duì)照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng /ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。測(cè)得A值后，先核算陰性對(duì)照A值的平均數(shù)（NC X ）和陽(yáng)性對(duì)照A值的平均數(shù)（PCX），兩個(gè)平均數(shù)的差（P-N）有必要大于一個(gè)特定的數(shù)值（例0.400），試驗(yàn)才有用。3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其間之一超出此規(guī)模，則棄去，而以另兩個(gè)陰性對(duì)照從頭核算NCX；如有兩個(gè)陰性對(duì)照A值超出以上規(guī)模，則該次試驗(yàn)無(wú)效。陽(yáng)性斷定值按下式核算：
陽(yáng)性斷定值=NCX+0.05
標(biāo)本A值＞陽(yáng)性斷定值的為陽(yáng)性，小于陽(yáng)性斷定值的為陰性。應(yīng)留意的是，式中0.05為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，而不是對(duì)各種試劑均可通用。
依據(jù)以上敘說(shuō)能夠看出，在這種辦法中陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照也起到試驗(yàn)的質(zhì)控效果，試劑蛻變和操作不妥均會(huì)發(fā)作"試驗(yàn)無(wú)效"的后果。
b.標(biāo)本/陰性對(duì)照比值
在試驗(yàn)條件（包含試劑）較難確保穩(wěn)定的情況下，這種判別法較為適宜。在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的A值后，核算S/N值。也有寫(xiě)作P/N的，這兒的P不代表陽(yáng)性(positive)，而是患者（patient）的縮寫(xiě)，不該誤解。為防止混雜，更宜用S/N表明。在早期的間接法ELISA中，有些作者定出S/N為陽(yáng)性規(guī)范，現(xiàn)多為各種測(cè)定所沿襲。實(shí)際上每一測(cè)定體系應(yīng)該用試驗(yàn)求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)留意的是，N所代表的陰性對(duì)照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對(duì)照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，致使反響后發(fā)作的本底也許較正常人血清的本底低得多。因而，這類(lèi)試劑盒規(guī)，如N<0.05<>（或別的數(shù)值），則按0.05核算，否則將呈現(xiàn)假陽(yáng)性成果。
（2）競(jìng)賽法
在競(jìng)賽法ELISA中，陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反響中酶物的濃度和參加競(jìng)賽按捺物的量，通常調(diào)理陰性對(duì)照的吸光度在1.0-1.5之間，此刻反響zui為靈敏。
競(jìng)賽法ELISA不易用自視判別成果，因肉眼很難區(qū)分弱陽(yáng)性反響與陰性對(duì)照的顯色區(qū)別，通常均用比色計(jì)測(cè)定，讀出S、P和N的吸光值。核算辦法首要也有兩種，即陽(yáng)性斷定值法和按捺率法。
a. 陽(yáng)性斷定值法
與間接法和夾心法中的陽(yáng)性斷定值法根本一樣，但在核算公式中引進(jìn)陽(yáng)性對(duì)照A值，現(xiàn)舉某種查看抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿，陽(yáng)性對(duì)照中抗HBc含量為125±1 00u/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。測(cè)得A值后，先核算陰性對(duì)照A值的平均值（NC X ）和陽(yáng)性對(duì)照A值的平均數(shù)（PCX），兩個(gè)平均數(shù)的差（N-P）有必要大于一個(gè)特定的數(shù)值（例如0.300）,試驗(yàn)才有用。
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