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小鼠肌肉糖原磷酸化酶(PYGM)elisa定量檢測試劑盒操作步驟和性能

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小鼠肌肉糖原磷酸化酶(PYGM)elisa定量檢測試劑盒操作步驟  

1.  使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

2.  根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

3.  加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

4.  甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

5.  每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

6.  甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

7.  每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

8.  取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

9.  在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

小鼠肌肉糖原磷酸化酶(PYGM)elisa定量檢測試劑盒  性能

1. 靈敏度:小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性:不與人其它細胞因子反應。

3. 重復性:板內、板間變異系數(shù)均小于10%。

4.局限性:6號標準品以上的結果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。

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