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人細(xì)胞周期素A1elisa定量檢測試劑盒的檢測原理和檢測前準(zhǔn)備工作

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人細(xì)胞周期素A1(CCNA1)elisa定量檢測試劑盒   檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心法:抗人細(xì)胞周期素A1(CCNA1)單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的細(xì)胞周期素A1(CCNA1)會與單抗結(jié)合,游離的成份被洗去。加入酶標(biāo)抗體,抗人細(xì)胞周期素A1(CCNA1)抗體與結(jié)合在單抗上的人細(xì)胞周期素A1(CCNA1)結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物,若反應(yīng)孔中有細(xì)胞周期素A1(CCNA1),辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑現(xiàn)藍(lán)色,加終止液變黃。在450nm處測OD值,細(xì)胞周期素A1(CCNA1)濃度與OD450值之間呈正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的細(xì)胞周期素A1(CCNA1)濃度。

人細(xì)胞周期素A1(CCNA1)elisa定量檢測試劑盒    檢測前準(zhǔn)備工作:

1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過50℃,使用時洗滌液應(yīng)為室溫)。當(dāng)日使用。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 于10000×g離心1分鐘,加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數(shù)次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為10ng/mL。)。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋(注:不要直接在反應(yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例 標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5mL10ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。  

4. *化抗體工作液:實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μL/孔計(jì)),實(shí)際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

5. 酶結(jié)合物工作液:實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μL/孔計(jì)),實(shí)際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。

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