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人臍靜脈平滑肌細(xì)胞操作方法

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更新時(shí)間:2017-08-07 10:40:25瀏覽次數(shù):122次

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產(chǎn)地 進(jìn)口 加工定制
適用領(lǐng)域 科研
人臍靜脈平滑肌細(xì)胞操作方法,冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽*儲(chǔ)存。

產(chǎn)品名稱:人臍靜脈平滑肌細(xì)胞操作方法
英文名稱:Human umbilical vein smooth muscle cells
規(guī)格:5×105cells/瓶
產(chǎn)品貨號(hào):FS-X0004
人臍靜脈平滑肌細(xì)胞操作方法的運(yùn)輸和保存
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
收到后的處理:
1)收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2)請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4)如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(90%以上)請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5)接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉?/a>。
人臍靜脈平滑肌細(xì)胞操作方法培養(yǎng)操作流程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基(F-12K,GIBCO,貨號(hào)21127-022),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換 液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例;
      1,細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml*,細(xì)胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
      2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
      3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

人膠原凝集素(Collectin)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Collectin ELISA Kit 
人伴侶蛋白10(CPN10)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human chaperonin 10,CPN10 ELISA Kit 
人纖調(diào)蛋白(FMOD)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human fibromodulin,FMOD ELISA Kit
人鈣網(wǎng)蛋白(CRT)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Calreticulin,CRT ELISA Kit 
人網(wǎng)膜素(omentin)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human omentin ELISA Kit
人基質(zhì)γ羧基*蛋白(MGP)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human Matrix Gla Protein,MGP ELISA Kit
人基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶素(MAT)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human matrilysin,MAT ELISA Kit
人溶酶體相關(guān)膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human human lysosomal-associated membrane protein 2,HLAMP-2 ELISA Kit
人軟骨糖蛋白39(HC gp-39)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human Cartilage glycoprotein 39,HC gp-39 ELISA Kit
人不透光相關(guān)蛋白(OPAs)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human Opacity-associated proteins,OPAs ELISA Kit
人鞭毛蛋白(flagellin)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human flagellin ELISA Kit
人多聚血清蛋白(PHSA)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human Poly Serium Antigen,PHSA ELISA Kit
人胞漿免疫球蛋白(CIg)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human cytoplasmic immunoglobulin,CIg ELISA Kit
人纖維介素蛋白(fgl2)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human Fibrinogen like peptide 2,fgl2 ELISA Kit
人泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human Ubiquitin,Ub ELISA Kit
人類粘蛋白(ORM)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human orosomucoid,ORM ELISA Kit
人彈性蛋白(ELN)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Elastin,ELN ELISA Kit
人套膜蛋白(iNV)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Involucrin,iNV ELISA Kit
人肌腱蛋白R(shí)(TN-R)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human tenascin-R,TN-R ELISA Kit
人生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43(GAP-43)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human growth-associated protein 43,GAP-43 ELISA Kit
人cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Cyclic AMP response element binding protein,CREB ELISA Kit
人聚集蛋白(Agrin)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Agrin ELISA Kit 
人Agouti相關(guān)蛋白(AGRP)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Agouti Related Protein,AGRP ELISA Kit 
人膜輔蛋白(MCP/CD46)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human membrane cofactor protein,MCP ELISA Kit
人延伸蛋白A(EloA)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human elongin A,EloA ELISA Kit
人?;碳さ鞍?ASP)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human Acylation Stimulating Protein,ASP ELISA Kit
人殺菌性/通透性增加蛋白(BPI)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human bactericidal/permeabilityincreasingprotein,BPI ELISA Kit
人細(xì)胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human matrix extracellular phosphoglycoprotein,MEPE ELISA Kit
人復(fù)制蛋白A(RPA-70)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human replication protein A,RPA-70 ELISA Kit
人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human cartilage oligomeric matrix protein,COMP ELISA Kit
人抗原提呈相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白/T細(xì)胞活化蛋白(TAP)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human transporter associated with antigen processing,TAP ELISA Kit
人免疫抑制酸性蛋白(IAP)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human immunosuppressive acidic protein,IAP ELISA Kit
人麥角蛋白IgA(Gliadin-IgA)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Gliadin IgA ELISA Kit
人發(fā)動(dòng)蛋白2(DNM2)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human dynamin 2,DNM2 ELISA Kit
人著絲粒蛋白B(CENP-B)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Centromere Protein,CENP-B ELISA Kit
人巨噬細(xì)胞刺激蛋白(MSP)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human macrophage stimulating protein,MSP ELISA Kit
人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human mammalian target of rapamyein,mTOR ELISA Kit
人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Nuclear matrix protein 22,NMP-22 ELISA Kit
人軟骨寡聚蛋白(COMP)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human cartilage oligomeric protein,COMP ELISA Kit
人多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human multidrug resistance-associated protein,MRP ELISA Kit 
人高速泳動(dòng)蛋白17(HMG-17)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human high mobility group protein 17,HMG-17 ELISA Kit
人空泡毒素相關(guān)蛋白A(VacA)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Vacuolating cytotoxin A,VacA ELISA Kit
人玻連蛋白/體外粘連蛋白(VN/CD51+CD61)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human vitronectin,VNR ELISA Kit
人波形蛋白(VIM)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human vimentin,VIM ELISA Kit
人表面活性蛋白D(SP-D)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Surfactant Protein D,SP-D ELISA Kit
人阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human arabinogalactan proteins,AGPs ELISA Kit
人N-乙?;?絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-*(AcSDKP)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKP ELISA Kit 
人腦紅蛋白(NGB)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Neuroglobin,NGB ELISA Kit 
人的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human rudimental bovine serum albumin check-up ELISA Kit
人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human amyloid beta peptide 1-40,Aβ1-40 ELISA Kit
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human macrophage inflammatory protein 2,MIP-2 ELISA Kit 
人凝膠原蛋白(gelson)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human gelson ELISA Kit
人踝蛋白(talin)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human talin ELISA Kit
人臍靜脈平滑肌細(xì)胞操作方法人角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human keratinocyte autocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA Kit
小鼠FMS樣*激酶3配體(Flt3L)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Mouse FMS-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt-3L ELISA Kit 
小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Mouse 

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