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核酸提取是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中重要的實(shí)驗(yàn)步驟。因?yàn)槲覀冊诜肿由飳W(xué)中所做的幾乎所有事情在開始都需要DNA或 RNA，無論是qPCR、分子克隆、下一代測序還是其他任何東西。 那么RNA和DNA提取實(shí)驗(yàn)中都有哪些問題呢？一起來學(xué)習(xí)一下吧！
1.產(chǎn)量低
如果您遇到的DNA/RNA產(chǎn)量低于您對樣品的預(yù)期，則需要考慮許多因素。通常，這是一個(gè)裂解問題。不wan全裂解是產(chǎn)量低的主要原因。它也可能是由不正確的綁定條件引起的。確保使用新鮮的優(yōu)質(zhì)乙醇（100% 200標(biāo)準(zhǔn)）稀釋緩沖液或添加到結(jié)合的步驟。劣質(zhì)乙醇或舊庫存可能已經(jīng)吸收了水分，并且濃度不正確。如果洗滌緩沖液制備不正確，您可能正在洗掉提取的DNA或RNA。
2.低純度
如果提取的DNA被蛋白質(zhì)污染（低260/280），那么您可能開始時(shí)樣品過多，而蛋白質(zhì)沒有wan全去除或溶解。
如果DNA的260/230比率不佳，則問題通常是結(jié)合或洗滌緩沖液中的鹽分。確保使用最高質(zhì)量的乙醇來制備洗滌緩沖液，如果問題仍然存在，請?jiān)俅蜗礈焐V柱。
與其他樣品相比，一些樣品含有更多的抑制劑。環(huán)境樣品特別容易出現(xiàn)純度問題，因?yàn)楦迟|(zhì)在提取過程中會(huì)被溶解。
腐殖質(zhì)的行為與DNA相似，很難從硅膠柱中去除。
3.降解
降解問題是RNA制備中常常到的問題。因?yàn)樵赗NA提取過程中，樣品儲(chǔ)存不當(dāng)或裂解效率低等情況都會(huì)導(dǎo)致降解。對于DNA提取，降解不是一個(gè)大問題，因?yàn)閷τ赑CR，DNA可以被剪切并且工作正常，如果不希望有較多剪切的DNA，可以使用弱裂解的方法。
以上就是有關(guān)于RNA和DNA提取實(shí)驗(yàn)中都有哪些問題的解答，如果你想了解更多請咨詢百奧創(chuàng)新客服哦~
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