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DNA或RNA鏈上堿基的苯環(huán)結(jié)構(gòu)在紫光區(qū)具有較強吸收,其吸收峰在260nm處。波長為260nm時,DNA或RNA的光密度OD260不僅與總含量有關,也隨構(gòu)型而有差異。
對標準樣品來說,濃度為1μg/ml時,DNA鈉鹽的OD260=0.02。當OD260=1時,DNA濃度約為50μg/ml;RNA濃度約為40μg/ml;寡核苷酸濃度約為33μg/ml。
當DNA樣品中含有蛋白質(zhì)、酚或其他小分子污染物時,會影響DNA吸光度的準確測定。一般情況下同時檢測同一樣品的OD260、OD280和OD230,計算其比值來衡量樣品的純度。
核酸純度判定(經(jīng)驗值):
純DNA:OD260/OD280≈1.8(>1.9,表明有RNA污染;<1.6,表明有蛋白質(zhì)、酚等污染)
純RNA:1.7<OD260/OD280<2.0(<1.7時表明有蛋白質(zhì)或酚污染;>2.0時表明可能有異硫氰酸殘存)
計算待測樣品的濃度:
DNA樣品的濃度(μg/μl):OD260×稀釋倍數(shù)×50/1000
RNA樣品的濃度(μg/μl):OD260×稀釋倍數(shù)×40/1000
使用Biochrom分光光度計,設定參數(shù)后,可實現(xiàn)直接獲取核酸的濃度、OD260/OD280等多個數(shù)值,從而對樣品有一個全面的判定。
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