液相色譜法分析中藥及植物藥的進(jìn)展(2)
來(lái)源:杭州云澤色譜儀器設(shè)備有限公司
2007年01月26日 15:45
果甙 、小檗堿、黃芩甙、 次黃芩素和甘草酸〔28〕。表2中列出了近年來(lái)為分析中藥制劑中的活性組分開(kāi)發(fā)的HPLC方法。
3.3 生物樣品
為了安全、合理、有效地使用藥物,需要了解藥物體內(nèi)過(guò)程的信息,藥代動(dòng)力學(xué)研究藥物及其制劑的體內(nèi)過(guò)程(吸收、分布、代謝、排泄)、作用機(jī)理及藥物效應(yīng)。建立藥物藥代動(dòng)力學(xué)模型的先決條件是開(kāi)發(fā)出能夠準(zhǔn)確測(cè)定藥物母體化合物及其代謝產(chǎn)物在各種體液中的濃度,分析的質(zhì)量則取決于方法的有效性和樣品設(shè)計(jì),如:取樣數(shù)目、時(shí)間間隔、取樣體積等。由于HPLC的選擇性好,自動(dòng)化程度高,分析時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn),多數(shù)實(shí)驗(yàn)和臨床的藥代動(dòng)力學(xué)研究都采用這一分析方法。
樣品制備在HPLC的生物樣品分析中是關(guān)鍵性的一步,其主要目的是:(1)將待分析物與蛋白質(zhì)分離;(2)去除影響分析物保留和定量準(zhǔn)確度的干擾物質(zhì);(3)濃縮待分析物以提高檢測(cè)的靈敏度和檢測(cè)限。生物樣品包括體液(血清、血漿、全血、尿等)、組織液和其它樣品。經(jīng)典的樣品預(yù)處理方法包括蛋白質(zhì)沉淀和萃取。液液萃取是zui常用的樣品預(yù)處理方法,它能起到樣品凈化(去除干擾化合物)和去除蛋白質(zhì)(將分析物從蛋白質(zhì)基質(zhì)中分出)的雙重作用。沉淀方法中,沉淀劑(有機(jī)改性劑、鹽、酸,如:三氯乙酸、高氯酸、鎢酸、偏磷酸)被加到樣品中,通過(guò)離心將沉淀除去,此方法的缺點(diǎn)是大大增加了分析時(shí)間,同時(shí)由于分析物在沉積蛋白質(zhì)上的吸附而降低了回收率〔29〕。在生物樣品分析中,直接進(jìn)樣技術(shù)在節(jié)約時(shí)間和勞力方面顯示出了相當(dāng)大的*性?,F(xiàn)已有幾種直接進(jìn)樣方法,如柱切換、直接進(jìn)樣固定相、膠束色譜等〔30〕。為了研究中藥的藥代動(dòng)力學(xué),Homma和Oka建立了一個(gè)測(cè)定尿樣中厚樸、8,9-二羥基-二氫木蘭醇、medicarpin、甘草素、黃芩甙元、 次黃芩素、木蝴蝶素A和二羥苯基羥基苯酮等8個(gè)組分的HPLC方法。樣品經(jīng)葡糖苷酸酶酶解后,分出親油性組分, 在正相柱上鑒定厚樸,在反相柱上鑒定其它組分〔31〕。異鉤藤堿是傳統(tǒng)中藥鉤藤的主要生物堿,有降低血壓等效應(yīng)。黃等〔32〕用乙醚萃取兔血漿,在ODS 柱上,以甲醇-水(95∶5,V/V)為流動(dòng)相,建立了兔血漿中異鉤藤堿濃度的HPLC方法。血藥濃度在0.016~16 mg/L 范圍內(nèi)呈線性關(guān)系,血漿zui低檢測(cè)濃度為0.016 mg/L,回收率為80.5%~85.1%。另有報(bào)道〔33〕,分別用乙醚和氯仿-異丙醇(4∶1,V/V)處理人血清和尿液,HPLC分析,*在體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程符合二室開(kāi)放模型,體內(nèi)消除符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)消除過(guò)程。葉等〔34〕開(kāi)發(fā)了測(cè)定血漿、尿及各種組織液中的淫羊藿甙的HPLC方法,此方法用乙酸乙酯萃取樣品,已用于淫羊藿甙的藥代動(dòng)力學(xué)研究。用乙醚萃取犬血漿、小鼠組織、體液中的*,HPLC分析,獲得了一些藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù).