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周青，錢(qián)美圓，仇文軍，徐波

應(yīng)用技術(shù)研究中心

準(zhǔn)備好樣品，設(shè)定好分離方法，選好色譜柱，確認(rèn)檢測(cè)波長(zhǎng)，OK！開(kāi)始制備純化吧~實(shí)驗(yàn)員小周熟練地開(kāi)始了一個(gè)新樣品的制備純化工作，一切看起來(lái)按部就班，盡在掌握。等等，這個(gè)峰信號(hào)似乎有點(diǎn)偏弱??？怎么回事？蛋白質(zhì)的zui大吸收波長(zhǎng)不都是在280nm么？

小周滿臉疑惑地跑去請(qǐng)教實(shí)驗(yàn)室大咖老徐。老徐看了看小周的分離方法，又問(wèn)了一些關(guān)于蛋白樣品的信息，慢悠悠地說(shuō)：“蛋白質(zhì)的檢測(cè)波長(zhǎng)一般是280nm沒(méi)錯(cuò)，但前提是蛋白質(zhì)系列中有較多帶有芳香環(huán)類(lèi)的氨基酸殘基，你這個(gè)蛋白樣品系列未知，zui大吸收波長(zhǎng)就不一定是280nm，你掃過(guò)紫外光譜沒(méi)有？”小周搖搖頭，表示實(shí)驗(yàn)室的紫外分光光度計(jì)壞了，暫時(shí)用不了。“這樣啊，別著急，傳授你一個(gè)新招兒，看好了，”老徐麻利地在iPad上點(diǎn)了幾下，讓小周再進(jìn)一針樣品，小周不明覺(jué)厲地照做了，“好了，樣品的zui大吸收波長(zhǎng)找到了，是210nm左右，你下次就以210nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)再?lài)L試制備吧，”老徐留下幾句話就飄走了。接下來(lái)，小周的實(shí)驗(yàn)就順利多了，他很快就拿到了目標(biāo)產(chǎn)物，又開(kāi)始了后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

雖然只是實(shí)驗(yàn)室的一個(gè)小插曲，但這個(gè)故事告訴我們：三泰科技又憋出新招了——全波段掃描功能。這個(gè)功能非常實(shí)用，一個(gè)常見(jiàn)的應(yīng)用場(chǎng)景就是未知吸收波長(zhǎng)的化合物的制備純化，有了全波段掃描功能的助力，我們就無(wú)需事先利用分光光度計(jì)對(duì)樣品進(jìn)行掃描，直接在SepaBeanTM machine系統(tǒng)里進(jìn)行上樣純化，在分離過(guò)程中通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)控洗脫峰的全波段掃描圖譜，及時(shí)修正儀器的檢測(cè)波長(zhǎng)，從而地完成分離純化任務(wù)。

上述蛋白純化案例的具體實(shí)驗(yàn)參數(shù)如表1所示：

表1. 蛋白樣品的分離純化實(shí)驗(yàn)參數(shù)設(shè)置

修正檢測(cè)波長(zhǎng)前及修正后的蛋白樣品分離圖譜如圖1和圖2所示：

圖1. 檢測(cè)波長(zhǎng)280nm下的蛋白樣品分離圖譜。

圖2. 檢測(cè)波長(zhǎng)215nm下的蛋白樣品分離圖譜。

全波段掃描功能的應(yīng)用范圍遠(yuǎn)遠(yuǎn)不止于上述情形，例如，在分離純化這樣的一組混合物樣品時(shí)，混合物里每個(gè)組分的zui大吸收波長(zhǎng)都不相同，對(duì)于事先確定的檢測(cè)波長(zhǎng)來(lái)說(shuō)就顯得不太適用，此時(shí)我們就可以通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)控洗脫峰的全波段掃描圖譜并及時(shí)修正檢測(cè)波長(zhǎng)，實(shí)現(xiàn)的目標(biāo)峰收集。后續(xù)我們實(shí)驗(yàn)室會(huì)推出更多此類(lèi)案例的應(yīng)用文章，敬請(qǐng)期待和保持關(guān)注！

文中所用蛋白純化柱訂購(gòu)信息如下表所示：

表2. SepaFlash® HP Bio C18系列反相柱參數(shù)

（填料:High efficiency spherical C18, 20-45μm, 300Å）