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*,哺乳動物細胞作為蛋白的表達系統(tǒng)具有糖基化、乙?;?、硫酸化、硫酸化等翻譯后修飾。而蛋白翻譯后修飾,如糖基化修飾,會直接影響蛋白在體內(nèi)的半衰期及穩(wěn)定性和生物學(xué)活性、影響配體識別及結(jié)合,影響其免疫原性,影響胞間作用等等功能。
目前,哺乳動物細胞已被廣泛用于重組蛋白、疫苗、抗癌試劑及其他臨床相關(guān)的藥物的生產(chǎn)中。
CHO細胞、BHK細胞、Sp2/0等細胞常被用于制備生物制藥。然而這些小鼠來源的細胞與HEK293細胞相比,缺乏人的細胞翻譯后修飾系統(tǒng),因此與人源系統(tǒng)表達的蛋白有差異。目前,HEK293細胞被廣泛用于生產(chǎn)蛋白、疫苗、抗癌試劑及重組腺病毒包被等。
HEK293細胞
1) 轉(zhuǎn)染效率高;
2) 可懸浮培養(yǎng)用于大規(guī)模表達;
3) 表達蛋白結(jié)構(gòu)接近其在人體內(nèi)構(gòu)象;
4) HEK293細胞在培養(yǎng)體系中能夠快速增長,高密度培養(yǎng)。
5) HEK293細胞與神經(jīng)元細胞一樣,對外界微環(huán)境較為敏感,利用這一特點,可用于藥物發(fā)現(xiàn)及細胞毒性測試。
293T細胞
293細胞中轉(zhuǎn)入SV40T-antigen基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株,即為293T細胞系。這使得包含SV40ori的質(zhì)粒能夠在該細胞系中顯著擴增,從而促進表達載體的擴增,促進蛋白的表達。
293T細胞除了可用于各類基因表達及蛋白生產(chǎn),還可用于高滴度逆轉(zhuǎn)錄病毒及其他病毒生產(chǎn),如腺病毒及其他哺乳動物病毒。
293T/17細胞
293T細胞中共轉(zhuǎn)染入pBND 和 pZAP 質(zhì)粒,獲得的具有G418耐受的細胞系即為293T/17細胞系。該細胞系在保有293T細胞的優(yōu)良性能之外,還具有高轉(zhuǎn)染性的特點。
293T/17 SF細胞
293T/17 SF細胞系指的是在293T細胞中轉(zhuǎn)入EBV基因形成的轉(zhuǎn)化細胞系,該細胞系主要用于細胞的瞬時轉(zhuǎn)染及蛋白表達。
293H細胞
293H細胞則指的是將293細胞馴化后得到的能夠在無血清培養(yǎng)體系下快速生長、具有高轉(zhuǎn)染效率及蛋白表達性能的細胞系。另外,該細胞系貼附力好,而被用于噬菌斑檢測等應(yīng)用。
293E細胞
293E細胞指的是在293-H細胞中插入EBNA-1基因的細胞系,該基因能夠穩(wěn)定表達EBV病毒的EBNA1蛋白。含有EBV復(fù)制起點(oriP)的重組表達質(zhì)粒,能夠在H293E細胞中復(fù)制,并實現(xiàn)蛋白的表達。
293-6E細胞
293-6E細胞則是在293-H細胞中插入截短過后的EBNA-1基因的細胞系,其能夠在無血清培養(yǎng)基中高表達生產(chǎn)蛋白及病毒載體。
293F細胞
293F細胞是一類能夠在無血清中高表達蛋白的野生型293細胞系。
293FT細胞
293FT細胞則是在293F細胞系中插入pCMVSPORT6TAg.Neo 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化細胞系,能夠快速增值,易轉(zhuǎn)染,其能夠用于慢病毒載體的生產(chǎn)。
293FTM細胞
293FTM細胞則是來源于Flp-InTMT-RETM293細胞,該細胞系中轉(zhuǎn)染了ecotropic receptor質(zhì)粒及MAPPIT(mammalian protein-protein interaction trap)報告質(zhì)粒,該細胞系主要用于蛋白互作的篩選。
293S細胞
293S細胞則指的被馴化成能夠懸浮培養(yǎng)且能夠耐受低鈣離子培養(yǎng)條件的293細胞系。
293SG細胞
將293S細胞用甲基磺酸乙酯誘變處理,蓖麻毒素選擇后再轉(zhuǎn)染pcDNA6/TR質(zhì)粒得到耐受蓖麻毒素的細胞系即為293SG。
該細胞系缺乏乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶I活性,因此可促進蛋白的Man5GlcNAc2N-聚糖型糖基化修飾。此外,該細胞系中具有四環(huán)素表達抑制基因,可用于四環(huán)素誘導(dǎo)的蛋白表達研究。
這類細胞系常用于同源的N-糖基化蛋白的表達。
293SGGD細胞
293SGGD細胞系則指的是在293SG轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-zeo-STendoT質(zhì)粒的細胞系,其主要用于糖基化工程研究中。
HEK293細胞系概覽
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