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酶免疫技術(shù)類型
酶免疫技術(shù)按照抗原抗體系統(tǒng)是定位于組織細胞上還是存在于液體樣品中分為酶免疫組化技術(shù)和酶免疫測定(EIA),酶免疫測定又可分為均相酶免疫測定和異相酶免疫測定。
(一) 均相酶免疫測定
均相酶免疫測定是利用酶標(biāo)記物結(jié)合成抗原抗體復(fù)合物后,標(biāo)記酶的活性就受到抑制,因而反應(yīng)后不需分離結(jié)合的和游離的酶標(biāo)記物,直接測定系統(tǒng)中的總標(biāo)記酶的活性的變化,即可確定結(jié)合的酶標(biāo)記物的數(shù)量,從而得到待測物的含量的一種技術(shù)。常用于半抗原或小分子抗原如藥物、激素等的測定。常用的技術(shù)類型有:
1.酶免疫增強測定技術(shù)(EMIT):酶免疫測定增強技術(shù)中酶活性的抑制是由于標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合后空間位阻了酶與底物結(jié)合的部位而造成的。反應(yīng)模式常用競爭法,即當(dāng)未標(biāo)記抗原多,競爭性的與抗體結(jié)合多,則標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合少,酶的活性受到抑制少,酶活性高。因此,終測得的酶活性與未標(biāo)記物的含量呈正相關(guān)。
2.克隆酶供體免疫分析(CEDIA):克隆酶供體免疫分析中酶是以供體和受體兩個片段存在的,只有兩個片段結(jié)合在一起形成全酶才能具有活性,當(dāng)標(biāo)記了供體酶的抗原與抗體結(jié)合后就空間位阻了酶供體(ED)與酶受體(EA)的結(jié)合,從而不能形成有活性的全酶,酶活性受到抑制。在反應(yīng)模式上同樣為競爭性結(jié)合分析方法,終測得的酶活性與未標(biāo)記抗原的含量呈正相關(guān)。
(一) 異相酶免疫測定
異相酶免疫測定與均相酶免疫測定的大區(qū)別是抗原抗體反應(yīng)平衡后,在反應(yīng)體系中同時存在著游離的和結(jié)合的兩種酶標(biāo)記物,兩種標(biāo)記物上的酶都具有酶活性,而只有結(jié)合的酶標(biāo)記物的形成與含量才代表待測物的存在與含量。因此,需將游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物分離,測定結(jié)合狀態(tài)的酶標(biāo)物的活性推算待測物的含量。因分離游離和結(jié)合的標(biāo)記物的方法不同,異相酶免疫測定又分成液相酶免疫測定和固相酶免疫測定兩類方法。液相酶免疫測定,由于游離的和結(jié)合的標(biāo)記物都存在于液相中,故需用分離劑將二者分開后才能測定結(jié)合狀態(tài)的酶標(biāo)記物的活性。而固相酶免疫測定,是通過載體將結(jié)合狀態(tài)的酶標(biāo)記物吸附在固相支持物上,只需洗滌就可將游離的酶標(biāo)記物去除。目前固相酶免疫測定以酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)為常用。
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