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多肽只能經(jīng)過(guò)共價(jià)修飾或者肽鍵斷裂被毀壞。不像蛋白質(zhì)是從充溢各種蛋白酶的細(xì)胞里被純化,合成的多肽被蛋白酶污染的幾率是很小很小的。固拓生物在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)在中性pH條件下,大多數(shù)生物實(shí)驗(yàn)的停止速度很慢。中性條件下細(xì)菌污染可能是一個(gè)嚴(yán)重的問(wèn)題(由于多肽是細(xì)菌的一種良好的營(yíng)養(yǎng)源)。因次,實(shí)驗(yàn)里用到的溶劑過(guò)濾比多肽的穩(wěn)定更重要。
稱重和紫外線吸收力是兩個(gè)常用的辦法。
b. 紫外線吸收性。假如您的多肽含有一個(gè)或殘基,多肽的定量剖析就變得愈加簡(jiǎn)單。
這在小的親水性肽,這不是問(wèn)題。在水溶液中,這些肽通常采用伸展構(gòu)象,一切的側(cè)鏈?zhǔn)峭暾┞队谌軇┲械摹5P(guān)于長(zhǎng)的疏水性多肽,固拓生物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這種假定是不完整正確的。有時(shí)可察看到低水平聚合和折疊。出于這個(gè)緣由,我們以為,在0.1N NaOH中,在293 nm處的吸光度是,由于在此條件下,肽是完整變性的。它的缺陷是,用于濃度測(cè)定的樣品不能被恢復(fù)。
基于上面的討論,為了多肽的濃度的準(zhǔn)確測(cè)定,我們激烈倡議在你的多肽的N-或C-末端添加一個(gè)殘基。
肽的溶解度最終取決于它的序列。在能夠操作的條件,pH值可能是最重要的。固拓生物發(fā)現(xiàn),在許多狀況下,改動(dòng)1-3個(gè)pH值單位能夠使十分穩(wěn)定的多肽完整溶解。過(guò)渡曲線通常是很峻峭的。在一個(gè)很窄的pH范圍內(nèi),溶液從混濁變得明澈。這可能是由于某些殘基電離狀態(tài)的改動(dòng),比方His。
關(guān)于難以溶解的肽,你能夠在有機(jī)溶劑中制備更高濃度的原液,例如DMS,并且在生物功用檢測(cè)期間稀釋肽。大多數(shù)的檢測(cè)能包容1-2%的DSMO,一些以至是5%。但是這并不是總是起作用的。一些肽當(dāng)從DMSO中稀釋時(shí)以至在更低濃度時(shí)匯集和沉淀。
▲岐昱 多肽合成儀
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