血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因zi后,分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。血清的主要作用是提供基本營養(yǎng)物質,包括激素、維生素、轉運蛋白、微量元素、擴散因子和生長因子等細胞增殖和維持的必需成分,促進細胞生長。那么怎么判斷血清的優(yōu)劣呢?
外觀
顏色:根據血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現出黃色或紅色,實際上,血紅蛋白含量的高低對血清質量并無直接影響,這個指標的意義在于能體現出采血過程的嚴謹規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點溶血,因為真正的胎牛血清凝血功能差,紅細胞容易破裂。
澄清度:高質量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質含量低,表現為稀薄、清淡,而新生牛血清,相對而言更加粘稠,顏色略深。
血清沉淀:血清有沉淀,是質量問題?血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產生,對血清質量沒有任何影響,沉淀的產生原因很多,跟加工生產方式、是否反復凍融密切相關。雖然沉淀并不直接影響血清的質量,但對細胞的顯微觀察有一定的阻礙。
理化檢測
總蛋白:中國藥典規(guī)定血清中總蛋白含量應為35-50g/L。一般胎牛血清的總蛋白含量相對比較低,隨著牛齡增加,血清中蛋白含量也會增加。
血紅蛋白:血紅蛋白的含量經常直觀體現在牛血清產品的外觀顏色,血清一般是淡黃色,有時也會偏紅,這是正?,F象,牛血清中的紅色來自于血紅蛋白中結合的血紅素。中國藥典規(guī)定血清中血紅蛋白應不超過200 mg/L。實際上,血紅蛋白含量的高低對血清的細胞培養(yǎng)效果并無直接影響,但良好的生產工藝能降低紅細胞的溶血。
內毒素:內毒素是革蘭氏陰性菌破裂后的細胞壁的成分,不同細胞在對內毒素的耐受性上表現出極大的差異,中國藥典規(guī)定血清內毒素含量≤10EU/ml。內毒素含量越低,表明血清處理環(huán)境越干凈。
微生物檢測
1、 細菌、真菌等生物在生產過程中幾乎都能100%控制。
2、 支原體可以通過3次0.1μm無菌過濾去除。
3、 噬菌體主要來源于采血、生產環(huán)境,是否出現噬菌體污染是檢測牛血清加工過程中是否受到外源性污染的一個重要指標。
病毒檢測
牛血清富含各種營養(yǎng),如果懷孕母牛本身攜帶有\(zhòng)病毒,血清就會受到污染。因此,從源頭上保證母牛健康、沒有各種傳染病,建立血清溯源機制,選擇經檢疫的正規(guī)渠道的血清,才有質量保障。
細胞增殖測試
血清的成分含量復雜,不同批次之間也存在差異,為了檢測不同批次血清對特定體外細胞株生長的效力,需要對每一批次的血清進行細胞培養(yǎng)測試。按照中國藥典要求選取Sp2/0-Ag14進行細胞增殖實驗,測定細胞生長曲線、倍增時間、克隆率及單細胞增殖率,同時測試多種常見細胞系如MRC-5、ST、293T、CHO、VERO等細胞的生長率,為血清品質評估提供多角度參考。
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