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我們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)時(shí)大部會(huì)以貼壁的形式生長(zhǎng)(除了取自血、脾或骨髓的細(xì)胞),使用的wan全培養(yǎng)基中的血清,含有許多帶陽(yáng)性電荷的促細(xì)胞附著因子(層黏連蛋白 Laminine、纖維鏈接蛋白 Fibronectin 等胞外基質(zhì)),能幫助細(xì)胞附著于帶陰性電荷的底物上,并形成鍵結(jié)、貼壁伸展。也就是所謂的細(xì)胞消化,常見的細(xì)胞消化方法有哪些?一起來(lái)學(xué)習(xí)一下吧!
機(jī)械消化法
直接用液體吹打或用刮刀,施予外力讓細(xì)胞與培養(yǎng)底物分離;適用于貼壁性弱的細(xì)胞傳代,但相較于其它消化方法,這種外力無(wú)法量化控制,細(xì)胞分散效果差,且可能會(huì)造成大量細(xì)胞破損,使內(nèi)容物釋放到培養(yǎng)基,進(jìn)而影響細(xì)胞傳代狀態(tài)。
離子螯合法
細(xì)胞膜表面蛋白大多需要鈣、鎂離子來(lái)維持與胞外基質(zhì)的穩(wěn)定鍵結(jié),當(dāng)然也包含各種黏附蛋白(例:整合素、鈣黏著蛋白、橋粒等),螯合劑會(huì)在不破壞細(xì)胞膜表面蛋白的狀況下,抽離這些離子,使黏附蛋白失活而減少細(xì)胞-細(xì)胞間及細(xì)胞-底物間的連接作用,讓細(xì)胞較容易在施予外力時(shí),脫離培養(yǎng)底物并促進(jìn)細(xì)胞分散。
0.02% EDTA是細(xì)胞傳代常用的離子螯合劑,在37℃作用效果佳(消化較敏感的細(xì)胞可在4℃作用),適用于消化一般貼壁性細(xì)胞或細(xì)胞表面標(biāo)記實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。
酶消化法
用蛋白水解酶消化連接細(xì)胞及培養(yǎng)底物的蛋白質(zhì),適用于消化貼壁性稍強(qiáng)的細(xì)胞。
以上就是常見的三種關(guān)于細(xì)胞消化的方法,如果你想了解更多請(qǐng)咨詢百奧創(chuàng)新客服~
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