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海洋微微型、微型和小型浮游生物調(diào)查

技術(shù)要求和調(diào)查要素

技術(shù)要求

采水層次

采水量

浮游植物

水深大于200 m的海區(qū),每次采水不少于1 000 cm2 ;水深小于200 m的海區(qū)不少于500 cm‘;發(fā)生富營(yíng)養(yǎng)化或赤潮海區(qū)視具體情況而定,一般每次采水100cm3。

浮游動(dòng)物

采水量依動(dòng)物的密度而定,一般調(diào)查控制在1dm°~50dm'之間。在浮游動(dòng)物豐富的內(nèi)灣和發(fā)生動(dòng)物性赤潮的水域,采水量為100 cm*。

垂直拖網(wǎng)深度.

水深大于200 m的海區(qū)拖網(wǎng)深度為200 m,水深小于200 m的海區(qū)拖網(wǎng)深度從底至表。

垂直分段拖網(wǎng)水層

根據(jù)測(cè)站深度規(guī)定采樣水層如表3(有些專(zhuān)項(xiàng)調(diào)查可視項(xiàng)目要求根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)溫度、鹽度、葉綠素等躍層分段采樣)。

連續(xù)觀測(cè)時(shí)間與次數(shù)

水深小于50 m的海區(qū)每3 h采樣一次,共采9次;水深大于50 m的海區(qū)每4 h采樣一次,共采7次。

種類(lèi)鑒定與計(jì)數(shù)

除需作特殊處理的微微型、微型浮游生物種類(lèi)以及培養(yǎng)觀察的特殊類(lèi)群之外,原則上鑒定到種的標(biāo)本比例應(yīng)在80%以上;鑒定到屬的比例應(yīng)在90%以上。水采樣品每次實(shí)際標(biāo)本鏡檢數(shù)不少于100個(gè)~200個(gè);網(wǎng)采樣品每次實(shí)際標(biāo)本鏡檢數(shù)不少于500個(gè)。

調(diào)查要素

調(diào)查要素包括微微型、微型和小型浮游生物的種類(lèi)組成和豐度分布(時(shí)間、空間分布)。

采樣

采樣設(shè)備

采水器.

采水器容積可為2.5 dm3、5 dm3或10 dm3。

采泥器

根據(jù)條件采用箱式采樣器、多管采樣器或彈簧采泥器采集甲藻等孢囊樣品。

網(wǎng)具

根據(jù)調(diào)查海區(qū)情況和采樣對(duì)象選用,見(jiàn)表4。

網(wǎng)底管

網(wǎng)底管套的篩絹必須與網(wǎng)衣篩絹的規(guī)格相同。

網(wǎng)口流量計(jì)

使用前必須經(jīng)過(guò)標(biāo)定，每航次標(biāo)定一次。

量角器

角弧形量角器。

沉錘

根據(jù)水流速度和風(fēng)浪大小,使用質(zhì)量為10 kg~40 kg的鉛制沉錘。

絞車(chē)及鋼絲繩

絞車(chē)變速范圍為0.3 m/s~1 m/s,并附有排纜裝置和鋼絲繩計(jì)數(shù)器，鋼絲繩直徑為3. 6 mm~5.0 mm。

吊桿

高度為5 m~6 m(深水拖網(wǎng)須大于6 m),負(fù)荷為500 kg~1 000 kg;吊桿的舷間距1 m左右,并能調(diào)節(jié)位置。

沖水設(shè)備

水泵、水管、水桶和吸水球等,用于沖噴收集粘貼在網(wǎng)衣或網(wǎng)底管套篩絹上的標(biāo)本。

采樣前的準(zhǔn)備

a)根據(jù)調(diào)查要素、站數(shù)、層次計(jì)算采樣數(shù)量,配以足量的樣品瓶、相應(yīng)的固定劑及其他器材。

b) 固定液: 魯哥氏液(Lugol's solution):100 g溶于1 dm3蒸餾水,加人50 g碘使其溶解,再加人100 cm3冰醋酸;緩沖:商用甲醛(體積分?jǐn)?shù)約為40%)加入同量蒸餾水，1 dm3 約20%的加100 g六次甲基四胺;多聚(體積分?jǐn)?shù)為25%)。

海上采樣與樣品保存

微微型(光合)浮游生物

a) 主要采集特定水層個(gè)體小于2.0 μm的生物;

b)微微型浮游生物包括異養(yǎng)細(xì)菌和自養(yǎng)型生物。對(duì)于微微型光合浮游生物( photosynthetic pi-coplankton),在此只表述使用落射熒光顯微鏡,根據(jù)其所含色素的熒光特性可區(qū)分為單細(xì)胞的藍(lán)細(xì)菌(cyanobacteria)和微微型光合真核生物( photosynthetic pico-eukaryote),前者 又通常以聚球藻(Synechococcussp)占優(yōu)勢(shì);

c) 采水樣使用進(jìn)口多瓶采水器或國(guó)產(chǎn)有機(jī)玻璃制成的2.5 dm3采水器;

d) 采集50~200 cm3水樣,加多聚固定(1%終濃度),用液氮保存。采樣情況記錄于表

微型浮游生物

a) 主要采集特定水層個(gè)體小于20 μm的微型金藻、微型甲藻、微型硅藻、無(wú)殼纖毛蟲(chóng)和領(lǐng)鞭蟲(chóng)等樣品;

b) 按預(yù)定水層和規(guī)定量采集水樣。如需去除大于20.0 μm的生物,可先用孔徑20 μm的篩絹預(yù)過(guò)濾。樣品用魯哥氏液固定,每1L水樣加人10cm*~15cm3,根據(jù)樣品的實(shí)際濃度可作適當(dāng)增減。如需要對(duì)樣品做電鏡觀察分析，則選用戊二醛固定，根據(jù)樣品濃度可加人樣品體積的2%~5%。采樣情況記錄于表。

小型浮游生物

a)主要采集水柱中個(gè)體小于 200 μm的絕大部分浮游植物、無(wú)殼纖毛蟲(chóng)、砂殼纖毛蟲(chóng)、輪蟲(chóng)、橈足類(lèi)幼體、放射蟲(chóng)和有孔蟲(chóng)等樣品;

b)按不同水 深選用小型浮游生物網(wǎng)或淺水II型網(wǎng)進(jìn)行垂直拖網(wǎng)，拖網(wǎng)速度:落網(wǎng)為0.5 m/s;起網(wǎng)為0.5 m/s~0.8 m/s,樣品用緩沖固定,加入量為樣品體積的5%,根據(jù)樣品的實(shí).際濃度可作適當(dāng)增減,并記錄于表;

c) 用手拖定性浮游植物網(wǎng)進(jìn)行水平(可在網(wǎng)口三根網(wǎng)繩的接合點(diǎn)加一個(gè)使錘)或垂直拖網(wǎng),樣品用魯哥氏液或緩沖固定;

d) 如需要對(duì)樣品做電鏡觀察分析,則選用戊二醛固定,根據(jù)樣品濃度可加入樣品體積的2%~5%。

孢囊

a)選擇在軟質(zhì)沉積環(huán)境如海底凹處和內(nèi)灣等處采集孢囊沉積物樣品;

b) 根據(jù)條件采用箱式采樣器、多管采樣器或彈簧采泥器采樣,取沉積物上部10 cm軟泥,分別用孔徑0.12mm、0.038mm和0.022mm篩網(wǎng)過(guò)篩，再對(duì)已過(guò)篩的樣品進(jìn)行超聲波處理以去除雜質(zhì);

c)一般對(duì)樣品進(jìn)行低溫避光保存,固定劑會(huì)使孢囊失去部分診斷特征,如需要長(zhǎng)期保存,可選用緩沖固定。

樣品分析

主要儀器和設(shè)備

落射熒光顯微鏡、光學(xué)顯微鏡、倒置顯微鏡、沉降器、濾器、支架、抽濾瓶、手持泵或真空泵。

樣品編號(hào)

各類(lèi)樣品須有總編號(hào)?？偩幪?hào)由代表采樣海區(qū)、采樣方式、使用網(wǎng)型、采樣年份和樣品序號(hào)等內(nèi)容的代號(hào)依次組成，每份貯存樣品的瓶外須貼有總編號(hào)的外標(biāo)簽,瓶?jī)?nèi)須放有總編號(hào)、站號(hào)和采樣日期等內(nèi)容的內(nèi)標(biāo)簽,填寫(xiě)表。

樣品分類(lèi)鑒定與豐度測(cè)定

標(biāo)本鑒定在有條件情況下采用活體與固定樣品相結(jié)合、網(wǎng)采與水采樣品相結(jié)合的方法,盡可能獲取水體中浮游生物群落的真實(shí)信息;定量計(jì)數(shù)一般以采水樣品為準(zhǔn),水柱的定量計(jì)數(shù)以網(wǎng)采樣品為準(zhǔn),網(wǎng)采樣品可作為種類(lèi)組成分析的補(bǔ)充和某些個(gè)體大于拖網(wǎng)篩絹孔徑的種類(lèi)的定量計(jì)數(shù)。

微微型光合浮游生物

a)按照預(yù)定層次量取10 cm3~50 cm3水樣;

b)通過(guò)直徑為25 mm、孔徑為0.2 μm的黑色核孔濾膜, 抽濾負(fù)壓不超過(guò)50 kPa;

c)取下濾筒,將濾膜放在載玻片.上,在濾膜上加一滴水樣,蓋上蓋玻片(濾膜兩面均不能有氣泡);

d)在落射熒光顯微鏡下使用綠光或藍(lán)光激發(fā),一般使用40倍物鏡觀察,隨機(jī)取至少20個(gè)視野，分別計(jì)數(shù)具有光亮的桔黃色熒光的含藻紅蛋白的聚球藻細(xì)胞和呈磚紅色熒光的含葉綠素的微微型光合真核生物細(xì)胞。計(jì)數(shù)結(jié)果記錄于表。

微型和小型浮游生物鑒定與計(jì)數(shù)

沉降計(jì)數(shù)法

用于采水樣品浮游生物計(jì)數(shù), ,計(jì)數(shù)結(jié)果記錄于表。

濃縮計(jì)數(shù)法

用于網(wǎng)采或采水樣品浮游生物計(jì)數(shù) ,計(jì)數(shù)結(jié)果記錄于表。

甲藻孢囊鑒定與計(jì)數(shù)

濃縮或直接顯微計(jì)數(shù),計(jì)數(shù)結(jié)果記錄于表。

資料整理

豐度計(jì)算

落射熒光顯微鏡計(jì)數(shù)

甲藻孢囊細(xì)胞濃度

孢囊細(xì)胞濃度以cells/cm*沉積物或cells/g沉積物干重計(jì)算。

填寫(xiě)報(bào)表

按本部分的要求和規(guī)定填寫(xiě)各種報(bào)表。

繪制分布圖

平面分布圖一般用等值線(xiàn)表示,取值標(biāo)準(zhǔn)如下:

a) 浮游植物細(xì)胞總數(shù)(網(wǎng)采樣品單位為10cells/m',采水樣品單位為10'cells/dm3 ): 5,10,50, 100,500,1 000,5 000,10 000;

b) 浮游植物優(yōu)勢(shì)種細(xì)胞豐度(網(wǎng)采樣品單位為10' cells/m’， 采水樣品單位為102 cells/dm*): 1,5,10,50, 100,500,1 000,5 000;

c) 孢囊細(xì)胞豐度(單位為cells/cm'): 1,10,100;

d) 浮游動(dòng)物個(gè)體豐度(網(wǎng)采樣品單位為10ind/m3，采水樣品單位為102 ind/dm3 ):1,5, 10,50,100。