細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
產(chǎn)品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,提供的人源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。科技提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、科技售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用.
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
大鼠表皮黑色素細胞說明書 | 5×105 | YS-X6618 |
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培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
皂苷異醇 ACS光譜級, ≥99.0%N-基-N-(3-磺基)間苯胺鈉鹽pUNO1-hTBK1
皂苷新戊二醇 99%苦楝素pUNO1-hTBKBP1
α -胰凝乳蛋白酶壬基酚(混合物) SUN-基-N-(2-羥基-3-磺基)間苯胺鈉鹽pUNO1-hTBX3b
α -胰凝乳蛋白酶對特辛基苯酚(POP) 分析標準品苯胺蘭pUNO1-hTECK
琥珀酸(二酸)對特辛基苯酚(POP) 97%苯胺蘭OpUNO1-hTET1
琥珀酸(二酸)苯酚 AR妥布pUNO1-hTFE3a
琥珀酸(二酸)1,2-二醇 GR,99.5%三辛胺pUNO1-hTFE3b
甘氨酸聚烯醇1788型 醇解度:87.0~89.0%(mol/mol)N,N’-四基二硫雙硫羰胺pUNO1-hTFEBa
甘氨酸氧化鉀 電子級,99.999% metals basis,鈉除外胸苷酸二鈉pUNO1-hTFRC
甘氨酸鄰苯二酸酐 AR三基吡啶pUNO1-hTGFA
大鼠表皮黑色素細胞說明書2 - 二膦-2' - (N組,n -二胺基) - 聯(lián)苯 97%Maackiain;高麗槐素結晶果糖Rat Pro-ADM(Proadrenomedullin) ELISA Kit
Rat PRO-ANP(Pro Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit
正基二(1-金剛烷基)膦 97%Diosmetin-7-O-β-D-glucopyranoside;香葉木素-7-O-葡萄糖苷乳糖醇Rat PS1(Presenilin 1) ELISA Kit
Rat PSA(Prostate Specific Antigen) ELISA Kit
二(1-金剛烷基)膦 97%Rosmarinic acid;迷迭香酸燒烤外撒料Rat PTD(Pentosidine) ELISA Kit
Rat PTEN(Phosphatase and Tensin Homolog) ELISA Kit
(1R,2R)-(+)-1,2-環(huán)己二胺L-鹽 98%Procyanidin B1;原花青素B1乳糖Rat PTGES(Prostaglandin E Synthase, Microsomal) ELISA Kit
Rat PTHR2(PaRathyroid Hormone Receptor 2) ELISA Kit
D-叔亮氨酸 98%Arctiin;牛蒡子苷/牛蒡苷甜蜜素Rat PTHRP(PaRathyroid Hormone Related Protein) ELISA Kit
Rat PTN(Pleiotrophin) ELISA Kit
2-(二-叔膦)-2'-基聯(lián)苯 98%Parthenolide;小白菊內(nèi)酯A848李氏鷯哥Rat PTX3(Pentraxin 3) ELISA Kit
Rat PUMA(P53 Upregulated Modulator of Apoptosis) ELISA Kit
1,3-二異基咪唑 97%Calycosin;毛蕊異黃酮D-甘露醇Rat PYGM(Glycogen Phosphorylase, Muscle) ELISA Kit
Rat pτ(phospho Tau Protein) ELISA Kit
(1,5-環(huán)辛二烯)釕, 聚合物 95%Oxytetracycline HCl;鹽酸土雞蛋黃粉Rat RETN(Resistin) ELISA Kit
Rat RNASET2(Ribonuclease T2) ELISA Kit
二(五基環(huán)戊二烯基)合釕(III)聚合物 98%Calycosin-7-O-β-D-glucoside;毛蕊異黃酮苷貴州李氏鳥食鳥糧畫眉鳥食Rat Rt3(Reverse Triiodothyronine) ELISA Kit
Rat RTN4(Reticulon 4) ELISA Kit
Dichlorobis(2-(二膦)胺)釕(II) 95%Neosperidin dihydrochalcone;新橙皮苷二查爾酮A821威畢升級版畫眉鳥食Rat RUNX2(Runt Related Transcription Factor 2) ELISA Kit
Rat RXFP1(Relaxin/Insulin Like Family Peptide Receptor 1) ELISA Kit
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。