實(shí)驗(yàn)操作步驟： 
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動(dòng)物。   
b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。 
c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

公司向您推薦大鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞的詳細(xì)說(shuō)明：

產(chǎn)品描述：提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，提供的人源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng)；3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時(shí)還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特性，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細(xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；

伊紅Y鈉L-組氨酸 99%氨基硫脲pUNO1-hSIGIRR

牛肉浸粉L-組氨酸 EP, USP ，非動(dòng)物源,用于細(xì)胞培養(yǎng)3-（2-氨基）吲哚pUNO1-hSIGLEC5

牛肉浸粉L-組氨酸 99.5%胰蛋白酶（豬胰）pUNO1-hSIKEb

牛肉浸粉L-賴氨酸鹽酸鹽 99%胰蛋白酶（牛胰）pUNO1-hSIRPB1a

鹽酸胍L-硫氨酸 99%臺(tái)盼藍(lán)pUNO1-hSIRPGa

鹽酸胍S-基-L-半胱氨酸 98%間苯二酚磺pUNO1-hSIRT1

鹽酸胍L-鳥氨酸鹽酸鹽 98%轉(zhuǎn)移核糖核酸（酵母）pUNO1-hSLAMF1

D-甘露醇L-酪氨酸 99%三樹脂pUNO1-hSLAMF2a

D-甘露醇6-氨基-1-己醇  97%曲拉通x-405pUNO1-hSLAMF3a

D-甘露醇3,4-二溴噻吩 97%曲拉通x-200pUNO1-hSLAMF4a

大鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞三氟烷銅(Ⅱ) 98%4-Hydroxyphenylacetic acid；對(duì)羥基苯酸水溶性硅油Rat INSR-β(Insulin Receptor Beta Subunit) ELISA Kit

Rat I-PTH(Intact PaRathormone) ELISA Kit

二環(huán)己基膦 97%Ibuprofen；布洛芬堿性蛋白酶Rat ITLN1(Inectin 1/Omentin) ELISA Kit

Rat JNK(C-Jun N-Terminal Kinases) ELISA Kit

1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷 97%Diclofenac sodium；雙芬酸鈉椰子油二醇酰胺（6501）Rat LCAT(Lecithin-Cholesterol Acyltransferase) ELISA Kit

Rat LEPR(Leptin Receptor) ELISA Kit

二環(huán)己基膦  98%Berberrubine；小檗紅堿脂肪酸酯氧基化物Rat LH(Luteinizing Hormone) ELISA Kit

Rat LIFR(Leukemia Inhibitory Factor Receptor) ELISA Kit

三氟烷亞銅苯絡(luò)合物（2:1） 99.9%Cisplatin；順鉑咪唑啉Rat LOX-1(Lectin Like Oxidized Low Density Lipoprotein Receptor 1) ELISA Kit

Rat Lp-a(Lipoprotein a) ELISA Kit

三氟烷亞銅苯絡(luò)合物（2:1） 98%Sodium cromoglycate；色苷酸鈉億菌優(yōu)Rat LPO(Lipid Peroxide) ELISA Kit

Rat Lptn(Lymphotactin) ELISA Kit

三氟烷亞銅(I)苯聯(lián)合體 (2:1) 90%Sambutoxin長(zhǎng)效增氧片Rat LTF(Lactoferrin) ELISA Kit

Rat MAPK(P38 Mitogen-Activated Protein Kinase) ELISA Kit

[1,3-雙(2,6-二異)咪唑-2-亞基]銅(I) 98%Chlorohemin；血紅素氧化鋁Rat MAPτ(Microtubule Associated Protein Tau) ELISA Kit

Rat MBP/MBL(Mannma Binding Protein/Mannan Binding Lectin) ELISA Kit

銅（I）噻吩- 2 -羧酸 95%Neoagarotetraose；新瓊四糖氧化鐵橙Rat M-CSF(Macrophage Colony-Stimulating Factor) ELISA Kit

Rat MDC/CCL22(Macrophage-Derived Chemokine) ELISA Kit

雙(六氟基酮)合銅(II)，水合 95%Amentoflavone；穗花杉雙黃酮氧化鐵藍(lán)Rat MDH1(Malate Dehydrogenase 1) ELISA Kit

Rat Methylase(Methylase) ELISA Kit

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。