活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒500T售后服務(wù)使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒500T售后服務(wù)操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請在1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒500T售后服務(wù)實驗步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
BxPC-3(人原位胰腺腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0005293T(人胚腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
SLAMF6 Others Human 人 SLAMF6 / Ly108 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
KB/V細(xì)胞，人口腔上皮癌長春新堿耐藥株 人血管內(nèi)皮細(xì)胞,EC-304細(xì)胞 大鼠骨髓瘤細(xì)胞;Y3-Ag 1.2.3
大鼠肝癌細(xì)胞;CBRH-7919 [CBRH7919]
CNTN3 Others Human 人 CNTN3 / Contactin-3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-C2
IL18R1 Others Rat 大鼠 IL18R1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
膀胱癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml
PAN-1細(xì)胞，胰腺導(dǎo)管上皮癌細(xì)胞 人細(xì)胞,HeLa-S3細(xì)胞 人小腦顆粒細(xì)胞總RNAHCGC tRNA
SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-7
GB Others Cytomegalovirus/CMV 巨細(xì)胞病毒 HCMV gB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
PROCR Others Cynomolgus 食蟹猴 Epcr / PROCR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
氣道平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)
正常小鼠Leydig細(xì)胞;TM3
LTEP-sm細(xì)胞，人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 小鼠皮膚細(xì)胞,JB6-C41細(xì)胞 CL-0122HUVEC(HUV-EC-C) (人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
TE-1(人食管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
HUtMEC-c 人子宮微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUtMEC) 500,000cells 臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)
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