購買客戶請先與我司細胞銷售人員核實訂購的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細胞價格并預約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細胞說明書并認真閱讀以方便你的實驗操作。產(chǎn)品僅用于科研
| 產(chǎn)品名稱 | *0F`感受態(tài)細胞 100ul*10 |
| 包裝 | 100ul*10 |
| 分類 | 克隆感受態(tài)細胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
AMA 大鼠抗心肌抗體 規(guī)格： 48T/96T
dsDNA 大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體 規(guī)格： 48T/96T
dsDNA 大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體 規(guī)格： 48T/96T
ASMA 大鼠抗平滑肌抗體 規(guī)格： 48T/96T
ATR 大鼠抗*受體 規(guī)格： 48T/96T
AT-Ⅲ 大鼠抗*Ⅲ抗體 規(guī)格： 48T/96T
AECA 大鼠抗內(nèi)皮細胞抗體 規(guī)格： 48T/96T
TRACP-5b 大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b 規(guī)格： 48T/96T
AsAb 大鼠抗精抗體 規(guī)格： 48T/96T
ATGA/TGAB 大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體 規(guī)格： 48T/96T
TPO-Ab 大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體 規(guī)格： 48T/96T
TPO-Ab 大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體 規(guī)格： 48T/96T
EMA IgA 大鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA 規(guī)格： 48T/96T
gp210 大鼠抗核膜糖蛋白210抗體 規(guī)格： 48T/96T
AMA 大鼠抗單核細胞抗體 規(guī)格： 48T/96T
TRAb 大鼠抗促甲狀腺素受體抗體 規(guī)格： 48T/96T
αFodrin IgG/IgA 大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA 規(guī)格： 48T/96T
大鼠抗IVIgG抗體ELISA Kit，48T/96T 大鼠抗IVIgG抗體ELISA Kit，48T/96T 規(guī)格： 48T/96T
大鼠抗IgE受體抗體ELISA Kit，48T/96T 大鼠抗IgE受體抗體ELISA Kit，48T/96T 規(guī)格： 48T/96T
MIF 大鼠巨噬細胞移動抑制因子 規(guī)格： 48T/96T
MIP-5 大鼠巨噬細胞炎癥蛋白5 規(guī)格： 48
4-氯吡咯并嘧啶 3680-69-1
3-溴丙基甲基醚 36865-41-5
3,4-二胺基芐氧基三氟化物 368-71-8
間三氟甲基苯腈 368-77-4
3,4-二氟硝基苯 369-34-6
3-溴-4-氯吡啶 36953-42-1
*0F`感受態(tài)細胞 100ul*104-氟茴香硫醚 371-15-3
5-溴嘧啶-2-羧酸 37131-87-6
4-氟苯胺 371-40-4
4-氟* 371-41-5
對氟苯硫酚 371-42-6
2-氟乙醇 371-62-0
氰乙酸 372-09-8
T/96T
注意事項:
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。
