?樣品要求及注意事項(xiàng)：
1、 如果提供實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)材料必須保證新鮮，請(qǐng)您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑，并用干冰運(yùn)輸。
2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ，也可以將樣品研磨后放在 Trigol中，動(dòng)植物組織 ： 50～100mg/mlTrigol，貼壁細(xì)胞：10cm2/mlTrigol，懸浮細(xì)胞：5×106動(dòng)植物，酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我們要對(duì)您提供的材料進(jìn)行評(píng)估。
4、 實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴(kuò)增基因的詳細(xì)信息。

毛樣枝孢霉探針?lè)晒舛縋CR試劑盒運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門(mén)的區(qū)域操作。

儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，產(chǎn)品僅用于科研請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
相對(duì)定量簡(jiǎn)介：
分析方法： ①雙標(biāo)曲法 ②2 － △Ct ③2 － △△Ct ④Pfaffi法
①雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法簡(jiǎn)介
公式：
優(yōu)點(diǎn)：分析簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)優(yōu)化簡(jiǎn)單
缺點(diǎn)：對(duì)每一個(gè)基因，每一輪實(shí)驗(yàn)都必需做標(biāo)準(zhǔn)曲線；必需有固定的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線；這些標(biāo)準(zhǔn)品并不代表樣品擴(kuò)增的真實(shí)狀態(tài)應(yīng)用：基因表達(dá)調(diào)控研究中與*的兩種相對(duì)定量方法之一

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

PowderAndros-2-en-17-one中文名：5α-雄甾-2-烯-17-酮性狀：Powder純度：98.0%

PowderEpiandrosrone中文名：表雄酮性狀：Powder純度：98.0%

PowderAndrosanolone 17-benzoa中文名：雄諾龍酯性狀：Powder純度：98.0%

PowderRosuvasain Calcium中文名：瑞舒伐他汀鈣性狀：Powder純度：98.0%

PowderAmbrisenan中文名：安倍生坦性狀：Powder純度：98.0%

PowderPropaceamol hydrochloride中文名：鹽酸丙帕他莫性狀：Powder純度：98.0%

PowderPirfenidone中文名：哌非尼酮性狀：Powder純度：98.0%

PowderAloglipin benzoa中文名：阿格列汀鹽性狀：Powder純度：98.0%

Powder2-[(6-Chloro-3,4-dihydro-3-mehyl-2,4-dioxo-1(2H)-pyrimidinyl)mehyl]benzonirile中文名：性狀：Powder純度：98.0%

PowderAloglipin中文名：阿格列汀性狀：Powder純度：98.0%

Powder(-)-Mandic acid benzyl esr中文名：D-(-)-扁桃酸芐酯性狀：Powder純度：98.0%

Powder4-(4-Fluorophenyl)-6-isopropyl-2-[(N-mehyl-N-mehylsulfonyl)amino]pyrimidinyl-5-yl-formyl中文名：性狀：Powder純度：98.0%

PowderMehyl (3R)-3-(r-buyldimehylsilyloxy)-5-oxo-6-riphenylphosphoranylidenehexanoa中文名：性狀：Powder純度：98.0%

Powder4-Bromomehyl-2-cyanobiphenyl中文名：性狀：Powder純度：98.0%

Powder1-Chloroehyl cyclohexyl carbona中文名：性狀：Powder純度：98.0%

PowderMehyl 2-ehoxybenzimidazole-7-carboxyla中文名：性狀：Powder純度：98.0%

Powder1-Ehyl-3-nirophhala中文名：性狀：Powder純度：98.0%
毛樣枝孢霉探針?lè)晒舛縋CR試劑盒ris(6,6,7,7,8,8,8-hepafluoro-2,2-dimehyl-3,5-ocanedionao)praseodymium(III)　三(6,6,7,7,8,8,8-七氟-2,2-二甲基-3,5-辛二酮基)鐠(Ⅲ)(>97.0%())　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

(S)-(+)-1,1'-Binaphhyl-2,2'-diylHydrogenPhospha　(S)-(+)-1,1'-聯(lián)萘基-2,2'-雙磷酸氫酯(>97.0%())　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

(R,R)-(-)-2,3-Buanediol　(R,R)-(-)-2,3-丁二醇(>96.0%(GC))　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

(S,S)-(+)-2,3-Buanediol　(S,S)-(+)-2,3-丁二醇(>97.0%(GC))　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

(-)-CamphanicAcid　(-)-樟腦烷酸(>98.0%())　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

(R)-(-)-2,2,2-rifluoro-1-(9-anhryl)ehanol　(R)-(-)-2,2,2-三氟-1-(9-蒽基)乙醇(>99.0%(GC))　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

(S)-(+)-2,2,2-rifluoro-1-(9-anhryl)ehanol　(S)-(+)-2,2,2-三氟-1-(9-蒽基)乙醇(>99.0%(GC))　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

N-(2-Carboxybenzoyl)-(-)-10,2-camphorsulam　N-(2-羧基苯甲酰)-(-)-10,2-樟腦磺內(nèi)酰胺(>98.0%(HPLC)())　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

p-AnisicAcid　對(duì)茴香酸(>99.0%(GC)())　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

9-AnhracenecarboxylicAcid　9-蒽羧酸(>97.0%(GC)())　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

5-(4-Mehoxycarbonylphenyl)-10,15,20-riphenylporphyrin　5-(4-甲氧羰基苯基)-10,15,2-三苯基卟吩(>90.0%(HPLC))　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

2-NaphhoylChloride　2-萘甲酰氯(>98.0%(GC)())　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

4-Dimehylaminocinnamaldehyde　4-二甲基氨基肉桂醛(>98.0%())　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

2,3-NaphhalenedicarboxylicAnhydride　2,3-萘二羧酸酐(>95.0%(GC)())　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

2,4,6-3(penadecafluorohepyl)-1,3,5-riazine　2,4,6-三(十五氟庚基)-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))　規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)