培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:精子稀釋液(計數液)
英文名稱:
產品規(guī)格:100ml
貨號:FS-X9929
產品介紹:
用途: 精子計數 注意事項: 通過相差顯微鏡觀察 儲存條件:室溫,12個月 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
中慢生華癸根瘤菌腦富含膜附著信號蛋白1抗體Human GLRA1 小鼠β甘露糖(β Manase)免疫試劑盒
鈉線菌屬卵黃狀黃斑病蛋白3抗體Human GLRB 小鼠β干擾(IFN-β/IFNB)免疫試劑盒
產短桿菌卵黃狀黃斑病蛋白抗體Human GLUD2 小鼠β-防御3 免疫試劑盒
弗吉尼亞鏈霉菌卵黃狀黃斑病蛋白4抗體Human Glutamate receptor 2 小鼠β-防御1 免疫試劑盒
pLKO.1-puro炭疽桿菌菌體蛋白抗體Human GLYATL1 小鼠β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)免疫試劑盒
生金色鏈霉菌EBV立即早期基因BRLF1抗體Human GLYCTK 小鼠β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)免疫試劑盒
紅色鹽場粒狀古菌腦表達X連鎖蛋白4抗體Human GLYR1(Glyoxylate reductase 1 homolog) 小鼠β半乳糖(βGAL)免疫試劑盒
釀酒酵母B淋巴新型蛋白1抗體Human GM2A 小鼠β基己糖A(β-Hex A)免疫試劑盒
巴氏醋桿菌核突觸蛋白β抗體Human GLYAT 小鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)免疫試劑盒
木拉克酵母屬BTRC2蛋白抗體Human GMCL1 小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)免疫試劑盒
生香毛霉BEND3蛋白抗體Human GMDS 小鼠β1腎上腺能受體(β1AR)抗體免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌BEND4蛋白抗體Human GLIPR1L1 小鼠α羥基丁脫氫(αHBDH)免疫試劑盒
耐輻射奇球菌BEND6蛋白抗體Human GIMAP7 小鼠α葡萄糖(α-glucosidase)免疫試劑盒
路德類酵母胎兒阿茲海默病抗原/核小體重塑因子抗體Human GINS3 小鼠α-黑色激(α-MSH)免疫試劑盒
鯊魚盧金星菌巴爾得-別德爾綜合征相關蛋白2抗體Human GLIS1 小鼠αS轉移(α-GST)免疫試劑盒
節(jié)桿菌巴爾得-別德爾綜合征相關蛋白5抗體Human GIPC1 小鼠α甘露糖(α Manase)免疫試劑盒
擬諾卡氏菌屬菌種Nocardiopsis│sp. 質量規(guī)格:>95.0%,BCβ淀粉樣蛋白1-42試劑盒日蟾它靈
熱帶假絲酵母Candida│tropicalis 質量規(guī)格:>98%,BRβ淀粉樣蛋白1-40試劑盒七葉皂IIb
球毛殼Chaetomium│globosum 質量規(guī)格:>97%,BCβ半乳糖試劑盒七葉皂IIa
精子稀釋液(計數液)曲霉 N,N-二乙基間甲苯多功能肽7
Bacillus tequilensis 2-甲酰-5-氟吡啶多功能肽2
繩狀籃狀 2,5-二-4,6-二甲基煙糖皮質
產黃青霉 2-萘磷化c-Jun氨基末端激
綠色木霉 2,4-二甲氧基脆性X智力遲鈍蛋白1
假單胞 (2--5-苯基)(4-氟苯基)甲酮信號4D
栓 3-氟-5-甲氧基苯乙角蛋白18
三葉草根瘤 3-氟-5-甲氧基苯甲彈性蛋白2,中性粒
鏈霉 2,4-二氟-5-溴苯色-2,3-雙加氧
耐輻射奇球 7-二乙氨基-4-甲基色CYP19
考克氏 2-甲基-3-氨基-5-溴吡啶半乳糖凝集
釀酒酵母 2-甲基-3--5-溴吡啶半胱蛋白7
番鴨細小病 3-溴-2-苯小而密低密度脂蛋白
綠毛殼 3-叔丁基二甲硅氧基戊二酐戊型肝炎病抗體
單增李斯特氏 1-(5-氟-2-苯基)乙酮賈地鞭毛蟲抗體
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)