產(chǎn)品介紹:
臺(tái)盼藍(lán)染色液主要用于細(xì)胞染色,用來檢測細(xì)胞的存活率。臺(tái)盼藍(lán)受到活體細(xì)胞的排斥,而死亡細(xì)胞攝入染料顯示藍(lán)色。通過常用的光學(xué)顯微鏡可以觀察到細(xì)胞染色情況,同時(shí)可以定量計(jì)數(shù),實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞存活率比較精確的定量分析。 儲(chǔ)存條件:4℃保存。 有效期:一年。 |
中文名稱:臺(tái)盼藍(lán)染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100T
貨號(hào):FS-X9839
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
乙阿比特龍酯英文名: Dorzolamide HCl富含半胱C端蛋白1抗體包裝5g
異環(huán)磷酰英文名: Doxazosin MesylateE1A激活基因激蛋白2抗體包裝1g
扎西他濱,2',3'-二脫氧胞英文名: Doxazosin Mesylate壁合成蛋白43抗體包裝5g
子囊霉英文名: Doxorubicin HCl/Adriamycin19號(hào)染色體開放閱讀框29抗體包裝1g
紫杉英文名: Doxorubicin HCl/Adriamycin磷化p21蛋白抗體包裝250mg
左亞葉鈣;酰四氫葉鈣英文名: Doxycycline HCl磷化周期檢測點(diǎn)激2抗體包裝25g
阿卡地新(AICAR)英文名: Doxycycline HCl磷化鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激2α抗體包裝5g
阿利克侖半富馬鹽英文名: Menadione磷化周期依賴性激2抗體包裝100g
阿齊沙坦英文名: Menadione磷化周期檢測點(diǎn)激1抗體包裝25g
阿司,阿西莫司英文名: Econazole nitrate磷化P27抗體/周期依賴激抑制劑抗體包裝25g
折地平英文名: Econazole nitrate磷化α-連環(huán)蛋白抗體包裝5g
安倍生坦英文名: Entecavir周期E2抗體包裝5g
力農(nóng)英文名: Entecavir磷化鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激CAMK2B/D/G抗體包裝250mg
地平英文名: Epalrestat 腫瘤易感候選基因3抗體包裝100g
奧美沙坦;奧美沙坦英文名: Epirubicin HCl磷化腫瘤易感候選基因3抗體包裝25g
華癸中間根瘤菌Mesorhizobium│huakuii 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR胰島淀粉樣多肽試劑盒鹽堿;Ephedrine hydr
CBS7227=IFO10179資源名稱: 假白布勒酵母 質(zhì)量規(guī)格:>95%脂溶性的原激活肽試劑盒原人參三;Protopanaxatri
棲熱菌Thermus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BR原Ⅱ試劑盒原人參二;Protopanaxdiol
臺(tái)盼藍(lán)染色液中國克魯維酵母 6-水楊重組人脂肪因子
黃色短桿 N,N',N'',N''',N'''',N'''''-六-O-乙?;鶜ち浅衫w維生長因子13
猴頭 制霉藥敏紙片補(bǔ)體C5轉(zhuǎn)化
金黃殼囊孢 氨芐青霉藥敏紙片特異性IgG抗體
貝雷絲孢酵母 異鋁KI67抗原
球孢白僵 丁香連氮β肌動(dòng)蛋白
總狀毛霉 大孔樹脂XDA-1β肌動(dòng)蛋白
沼澤紅假單胞 D-腺病抗體
大腸埃希氏 愈創(chuàng)木酚支原體
溶桿 鄰苯二甲核因子κB抑制物激
串珠鐮刀 羊毛脂總膽固
氧化微桿 雙酚 白介13
核青霉 高效氟菊酯凝血
類芽孢桿 環(huán)沙星FAT4
明尼蘇達(dá)被毛孢 鄰苯二甲二癸酯高分子量脂聯(lián)