操作流程
1. 整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
腦膜炎奈瑟菌PCR熒光定量檢測試劑盒 | Neisseria meningitidisPCR | 多種規(guī)格 | BJ-P7059 |
特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲(chǔ)存條件:-20℃以下,有效期12個(gè)月。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項(xiàng) 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。 6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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1000U 人源脫/脫 (AP) 核酸內(nèi)切激 APE 1 -20℃保存
1 管 Rosetta-gamiB(DE3)大腸桿菌 Rosetta-gami B(DE3) E.coli Strain -80℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human TATA box-binding protein-like protein 1
50次 柱式植物DNAout Column Plant DNAOUT 常溫 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Spondin-2
月桂基硫酸鹽胨肉湯(LST)顆粒 Lauryl Sulfate Tryptose Broth 300ml/袋*10
5g Inosine,Free Base 室溫干燥保存 0.156-10 ng/mL 人纖毛軸動(dòng)力蛋白重鏈17(DYH17)ELISA試劑盒
YGC瓊脂 YGC Agar 250g
1 管 Orgami(DE3)plysS大腸桿菌 Origami(DE3)plysS E.coli Strain -80℃保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human T-cell surface glycoprotein CD5
10g 考馬斯亮藍(lán)R-250 Coomassie Blue R-250 常溫保存RVS肉湯進(jìn)口、國產(chǎn)RVS Broth250克食品中沙門氏菌檢驗(yàn)選擇性增菌
乳糖莫能葡萄糖醛酸瓊脂 LMG Agar 250g 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Ephrin-A1
250mL Sodium Bicarbonate Buffer(鈉緩沖液),1M,pH9.0 Sodium Bicarbonate Buffer,1M,pH9.0 常溫保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Autophagy protein 5
50mg 小牛胸腺 DNA Deoxyribonucleic Acid Sodium Salt From Calf Thymus 4℃保存 3.12-200 ng/mL 人軟骨寡聚蛋白(COMP)ELISA試劑盒
腦膜炎奈瑟菌PCR熒光定量檢測試劑盒DS-1040 Tosylate TAFIa抑制劑(DS-1040 Tosylate) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg
Vericiguat guanylate cyclase抑制劑(Vericiguat) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
Levcromakalim KATP激活劑(Levcromakalim) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
AS8351 KDM5B抑制劑(AS8351) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
NS-018 hydrochloride JAK2抑制劑(NS-018 hydrochloride) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
Ozagrel sodium 血栓素A2合成酶抑制劑(Ozagrel sodium) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
VTP-27999 2,2,2-trifluoroacetate 烷基胺腎素抑制劑(VTP-27999 2,2,2-trifluoroacetate) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
ML277 K(v)7.1鉀離子通道激動(dòng)劑(ML277) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
Nortadalafil PDE5抑制劑(Nortadalafil) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
UNC2881 Mer激酶抑制劑(UNC2881) 1mL(10mM)|10mg|50mg
Temocapril hydrochloride ACE抑制劑(Temocapril hydrochloride) 1mL(10mM)|10mg|50mg