實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
佩氏著色霉熒光定量PCR試劑盒探針法 | Fonsecaea pedrosoi | 多種規(guī)格 | BJ-P9587 |
實(shí)驗(yàn)外包:
1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測:HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動(dòng)物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項(xiàng) 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。 6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
ASK1抑制劑(Selonsertib)Selonsertib1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
Btk激酶活性抑制劑(AVL-292)AVL-2921mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
JAK2和JAK3抑制劑(AT9283)AT92831mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
Kit和PDGFRα/β抑制劑(Masitinib)Masitinib1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg
SMYD2抑制劑(LLY-507)LLY-5071mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg
紡錘體驅(qū)動(dòng)蛋白抑制劑(KSP抑制劑)(ARRY-520)ARRY-5201mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
IKK-2和IKK-1抑制劑(BMS-345541)BMS-3455411mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
泛素特異性蛋白酶7抑制劑(USP7抑制劑)(P22077)ubiquitin-specific protease USP7 inhibitor1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
Src/Abl抑制劑(Bosutinib)Bosutinib1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg
PLK1抑制劑(Rigosertib sodium)Rigosertib sodium1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
佩氏著色霉熒光定量PCR試劑盒探針法人 eIF2a 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽微管(microtubules)熒光染色試劑盒 10次
人 eIF2a 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽粘著斑蛋白(vinculin)熒光染色試劑盒 10次
人 IL1R2 / CD121b 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽驅(qū)動(dòng)蛋白(kinesin)型ATP活性連續(xù)反應(yīng)光譜法定量檢測試劑盒 20次
人 IL1R2 / CD121b 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽3,4-二氫酮衍生物Monastrol(K-ATPase 抑制劑)
人 CD155 / PVR 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽細(xì)胞αSMA蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒 10/20次
人 ACE2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽載玻片細(xì)胞αSMA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
人 CA IX 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽冰凍切片組織αSMA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
人 WIF1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽石蠟切片組織αSMA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
人 WIF1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽載玻片細(xì)胞αSMA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
人 IL1RL1 / ST2 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽冰凍切片組織αSMA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
人 IL1RL1 / ST2 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽石蠟切片組織αSMA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次