實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
淋病奈瑟菌PCR熒光定量檢測試劑盒 | Neisseria gonorrhoeaePCR | 多種規(guī)格 | BJ-P7057 |
特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲存條件:-20℃以下,有效期12個月。
二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設立一個專用的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應全部轉移至標本準備區(qū),并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
2 ug pBiFC-bFos(ΔZIP)VC155 pBiFC-bFos(ΔZIP)VC155 低溫運輸,-20℃保存 0.625-40 ng/mL 人表面糖蛋白MUC18(Cell surface glycoprotein MUC18) ELISA試劑盒
變形桿菌成套生化鑒定管(SN) 13種/盒*10
2 ug pLOX-Ttag-iresTK pLOX-Ttag-iresTK 低溫運輸,-20℃保存 7.8-500 ng/mL ELISA Kit for Human Immunoglobulin M
2 ug pGEM-luc pGEM-luc 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily A member 2
25mL 十二烷基磺酸鈉清除劑 SDS Erasol -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人D-氨基酸氧化(DAAO)ELISA試劑盒
4次 大提柱式血液DNAout Maxi Column Blood DNAOUT 常溫 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human DNA mismatch repair protein Msh2
嗜冷菌計數(shù)瓊脂 Psychrophilic bacteria count agar 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Legumain
2 ug pUB6/V5 His A pUB6/V5 His A 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Cortisol
2 ug pMAD pMAD 低溫運輸,-20℃保存
150次 血液DNAout Blood DNAOUT 常溫 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human S-phase kinase-associated protein 2
30次 一站式長效期SDS-PAGE電泳套裝 (適合2-30 kD蛋白) One-Stop Stable SDS-PAGE Pack 4℃保存(上樣緩沖液需要-20℃保存) 0.156-10 ng/mL 人輔肌動蛋白α3(ACTN3)ELISA試劑盒
淋病奈瑟菌PCR熒光定量檢測試劑盒NS-304 PGI2受體激動劑(NS-304) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
Edoxaban tosylate monohydrate FXa抑制劑(Edoxaban tosylate monohydrate) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
Moexipril hydrochloride 血管緊張素轉化酶抑制劑(Moexipril hydrochloride) 1mL(10mM)|50mg|100mg
Zofenopril calcium ACE抑制劑(Zofenopril calcium) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
Cariporide Na+/H+交換抑制劑(Cariporide) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
Trimetazidine dihydrochloride 脂肪酸代謝抑制劑(Trimetazidine dihydrochloride) 1mL(10mM)|10mg|50mg
Nitroflurbiprofen 環(huán)氧合酶(COX)抑制劑(Nitroflurbiprofen) 1mg
ICA SK channel抑制劑(ICA) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg
VTP-27999 Hydrochloride 烷基胺Renin抑制劑(VTP-27999 Hydrochloride) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
Revizinone PDE III抑制劑(Revizinone) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg
Tanshinone I IIA型人重組sPLA2和兔重組cPLA2抑制劑(Tanshinone I) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg