操作流程
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機(jī)檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
鴨乙型肝炎病毒PCR熒光定量檢測試劑盒 | Duck Hepatitis B Virus(DHBV)PCR | 多種規(guī)格 | BJ-P6665 |
特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲存條件:-20℃以下,有效期12個月。
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個專用的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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1g 肝素鋰 Heparin Lithium Salt 室溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 28
250mL MES Buffer,1.0M,pH5.5 MES Buffer,1.0M,pH5.5 常溫保存 0.312-20 ng/mL 人西梅脫寡肽(Thimet oligopeptidase)ELISA試劑盒
10g 酸洗玻璃珠(直徑:200μm) 常溫 31.2-2000 pg/mL 人鋸齒狀同源異型盒蛋白2(Homeobox protein engrailed-2)ELISA試劑盒
單料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管(含小倒管) Lactose Bile Ferment Broth 10ml*20支/包3.5%氯化鈉三糖鐵瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)3.5% NaC1 TSI Agar250克副溶血弧菌生化試驗鑒別
300次 即用型熒光定量RT-PCR試劑盒 Instant Realtime RT-PCR Kit -20℃保存 0.312-20 ng/mL 人非組蛋白染色體蛋白質(zhì)HMG-14(Non-histone chromosomal protein HMG-14)ELISA試劑盒
臨床檢驗培養(yǎng)基 0.156-10 ng/mL 人N甲酰基縮受體2(N-formyl peptide receptor 2)ELISA試劑盒
2 ug pHY43 pHY43 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 0.312-20 U/L 人醇脫氫(SORD)ELISA試劑盒
5g α -萘乙酸 NAA (α-Naphthalene Acetic Acid) 室溫保存YPD瓊脂 進(jìn)口、國產(chǎn)Yeast Peptone Dextrose Agar用于測定酵母菌總數(shù)(GB標(biāo)準(zhǔn))250
500mL SDS-PAGE濃縮膠配膠液 SDS-PAGE Stacking Gel Buffer 4℃保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Troponin T, cardiac muscle
5nmol 接頭DNA(pSma I) Adaptors -20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人半胱天冬1(P-1)ELISA試劑盒
50T 豬鏈球菌PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human P2X purinoceptor 7
鴨乙型肝炎病毒PCR熒光定量檢測試劑盒巴利森苷C標(biāo)準(zhǔn)品分子量:728.65 分子式:C32H40O19 號:174972-80-6 檢測方式:高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī)格:20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝) 性狀: 本品白色粉末
巴利森苷B標(biāo)準(zhǔn)品號:62499-28-9 分子式:C45H56O25 檢測方式:高效液相色譜法HPLC≥97% 規(guī)格:20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝) 性狀: 本品白色粉末 作用與用途:本品用于含量測定。
巴利森苷A標(biāo)準(zhǔn)品分子式:C45H56O25 英文名:Coniferin 分子量: 號:62499-28-9 檢測方式:高效液相色譜法HPLC≥97% 規(guī)格:20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝)
牡荊素葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品分子式:C27H30O15 英文名:Glucosyl-vitexin 分子量:594.519 號:76135-82-5 檢測方式:高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī)格:20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝)
氯化纈草素標(biāo)準(zhǔn)品分子量:458.93分子式:C22H31CIO8號:51771-49-4檢測方式:高效液相色譜法HPLC≥98%規(guī)格:20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝) 性狀: 本品為白色粉末
非洲防己堿標(biāo)準(zhǔn)品分子量:338.38 分子式:C20H20NO4 號:3621-36-1 檢測方式:高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī)格:20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝) 性狀: 本品黃色結(jié)晶粉末
莪術(shù)烯醇標(biāo)準(zhǔn)品分子式:C15H22O2 英文名: 分子量: 號: 檢測方式:高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī)格:20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝)
表小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品分子量:336.360 分子式:C20H18NO4 號:6873-9-2 檢測方式:高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī)格:20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝) 性狀: 本品黃色結(jié)晶粉末
β-乙酰氧基異戊酰阿卡寧標(biāo)準(zhǔn)品分子量:430.45分子式:C23H26O8號:69091-17-4檢測方式:高效液相色譜法HPLC≥98%規(guī)格:20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝) 性狀: 本品黃色結(jié)晶粉末