特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
田鼠分枝桿菌PCR熒光定量檢測試劑盒 | Mycobacterium microtiPCR | 多種規(guī)格 | BJ-P7019 |
圖片
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設立一個專用的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
|
操作流程
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū),并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
125mL Triton Lysis Buffer with Glycerol,2X Triton Lysis Buffer with Glycerol,2X 常溫保存ONPG發(fā)酵管進口、國產(chǎn)ONPG發(fā)酵管20支BR
0.1mg 山羊抗小鼠IgG,熒光素555標記 Goat Anti-Rabbit IgG ,IF555 Conjugate 4℃保存 7.8-500 pg/mL. 人白介素15(IL-15)ELISA試劑盒
2 ug pIL253 pIL253 低溫運輸,-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Angiopoietin-related protein 4
欣 Fortum 3mg/支*5 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Cyclin-dependent kinase 5
100g RNSDS (十二烷基) 常溫 0.312-20 ng/mL 人抵抗素(RETN)ELISA試劑盒
2.5g 木聚糖 Xylan 室溫干燥保存
2 ug pSos MAFB pSos MAFB 低溫運輸,-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Adenomatous polyposis coli protein
MKTTn肉湯(ISO) MKTTn Broth 250g牛膽酸進口、國產(chǎn)Cholic acid25克BR,98%
2 ug pLVX-ZsGreen1-N1 pLVX-ZsGreen1-N1 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Serine/arginine-rich splicing factor 2
麥芽糖發(fā)酵管 20支 0.312-20 ng/mL 人臂板蛋白-3G(SEMA-3G)ELISA試劑盒
半固體瓊脂 Semi-solid agar 250g 78-5000 pg/mL 人神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試劑盒
田鼠分枝桿菌PCR熒光定量檢測試劑盒Dimethylenastron Eg5抑制劑(Dimethylenastron) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
IMR-1A Notch抑制劑(IMR-1A) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg
Phen-DC3 Trifluoromethanesulfonate 解旋酶FANCJ和DinG抑制劑 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg
Trichlormethine hydrochloride 細胞生長抑制劑(Trichlormethine hydrochloride) 1mL(10mM)|100mg
IDO-IN-3 IDO抑制劑(IDO-IN-3) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
Fadrozole aromatase抑制劑(Fadrozole) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
QS11 ADP-核糖基化因子1的GTP酶活化蛋白抑制劑(QS11) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
Tetrabenazine (+)- VMAT-2抑制劑(Tetrabenazine (+)-) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
MK-2461 c-Met抑制劑(MK-2461) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg
EMD534085 kinesin-5抑制劑(EMD534085) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg
BI-847325 MEK和極光激酶(AK)雙重抑制劑(BI-847325) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg