細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X97094 |
商品屬性：
名稱 小鼠甲狀腺濾泡上皮細胞 2.組織來源：甲狀腺組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠甲狀腺濾泡上皮細胞分離自甲狀腺組織；甲狀腺是脊椎動物非常重要的腺體，屬于內分泌器官。在哺乳動物身體中，它位于頸部甲狀軟骨下方，氣管兩旁。甲狀腺表面有結締組織被膜，表面結締組織深入到腺實質，將實質分為許多不明顯的小葉，小葉內有很多甲狀腺濾泡和濾泡旁細胞。甲狀腺控制使用能量的速度、制造蛋白質、調節(jié)機體對其他賀爾蒙的敏感性。甲狀腺依靠制造甲狀腺素來調整這些反應，有T3和T4。這兩者調控代謝、生長速率還有調解其他的身體系統(tǒng)。T3和T4由碘和酪胺酸合成。甲狀腺也生產(chǎn)降鈣素，調節(jié)體內鈣的平衡。其中，甲狀腺濾泡上皮細胞（也稱為濾泡細胞或主要細胞）是在甲狀腺細胞是負責生產(chǎn)和分泌甲狀腺激素，甲狀腺素（T4）和三碘甲狀腺原氨酸（T3）。 5.方法簡介： ()實驗室分離的小鼠甲狀腺濾泡上皮細胞采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： ()實驗室分離的小鼠甲狀腺濾泡上皮細胞經(jīng)TG（甲狀腺球蛋白）免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M022 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)上皮細胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
人白介素35(IL-35)免疫試劑盒進口、分裝
人2 型次黃核苷酸脫氫(IMPDH)(IMPDH2)免疫試劑盒進口、分裝
牛α干擾素(IFN-α)免疫試劑盒*直銷
猴骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體2型(BMPR2)免疫試劑盒進口、組裝
大鼠彈力蛋白免疫試劑盒*直銷
植物過氧化氫2(CAT2/CAT)免疫試劑盒進口、組裝
接觸皿培養(yǎng)基 英文名稱：contacts medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
TSN瓊脂 英文名稱：TSN Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
豬可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)免疫試劑盒進ows\system32\EhStorShell.dll
小鼠甲狀腺濾泡上皮細胞Parvovirus B19(PVB19)細小病毒B19 探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 1-2周Phospho-MKP1 (Ser296 + Ser318) 磷酸化絲裂原活化蛋白激磷酸-1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Cortex periplocae香加皮探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周MAPKAPK5/PRAK p38調節(jié)/激活蛋白激抗體 規(guī)格: 0.2ml
Turkey Hemorrhagic Enteritis Virus(TuHEV)火雞出血性腸炎病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Neuropilin-2 神經(jīng)纖毛蛋白-2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Nematodirus spathiger匙狀*毛樣線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CHRNA7 堿型乙酰受體α7抗體 規(guī)格: 0.1ml
Akabane Disease Virus(AKAV)牛赤羽病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-PDGFRA(Tyr762) 磷酸化小板源性生因子受體α 規(guī)格: 0.1ml
黃魚源性成分PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周GRGDS(Gly-Arg-Gly-Asp-Ser) 兔抗粘附多肽抗體 規(guī)格: 0.2ml
Baculovirus Penaei(BP)對蝦桿狀病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 1-2周PNPO 磷酸吡哆醇氧化抗體 規(guī)格: 0.2mlSLAMF9 CD2F-10抗體 規(guī)格: 0.2ml
Pseudomonas syringae pv. syringae丁香假單胞桿丁香致病變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-MAP1LC3A(Ser12) 磷酸化自噬微管相關蛋白輕鏈3抗體 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-rabbit IgG/Bio 標記的羊抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml
Cortex mori桑白皮PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Retinoic acid induced 17 維甲酸誘導蛋白17抗體 規(guī)格: 0.2mlCYP46 24S－羥化 規(guī)格: 0.2ml
Helicobacter cinaedi同性戀螺桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周FLAG Tag(CT) FLAG Tag標簽抗體（C端） 規(guī)格: 0.1mlphospho-ATM(Ser1981) 磷酸化毛細管擴張性共濟失調癥突變蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
