實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
麻風(fēng)分枝桿菌熒光定量PCR試劑盒探針法 | Mycobacterium leprae | 多種規(guī)格 | BJ-P9815 |
特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲存條件:-20℃以下,有效期12個月。
二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設(shè)立一個專用的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。
GL1合酶抑制劑(Genz-123346 free base)Genz-123346 free base1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg
醛糖還原酶抑制劑(Epalrestat)Epalrestat1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
mAChR激動劑(Bethanechol chloride)Bethanechol chloride1mL(10mM)|200mg|5g
AMPK變構(gòu)激動劑(ZLN024 hydrochloride)ZLN024 hydrochloride1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
SGLT1/2抑制劑(LX-4211)LX-42111mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg
DPP-4抑制劑(Alogliptin Benzoate)Alogliptin Benzoate1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
FXR激動劑(WAY-362450)WAY-3624501mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
α葡萄糖苷酶抑制劑(Acarbose)Acarbose1mL(10mM)|200mg|1g
食欲抑制劑(Mazindol)Mazindol1mL(10mM)|50mg|100mg
Rev-erbα激動劑(GSK4112)GSK41121mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
麻風(fēng)分枝桿菌熒光定量PCR試劑盒探針法人 DPEP2 / MBD-2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)組織糖原硫酸蒽酮比色法定量檢測試劑盒 20次
人 Dehydropeptidase-I / DPEP1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)細胞尿素比色法定量檢測試劑盒 20次
食蟹猴 CD3D & CD3E Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)組織尿素比色法定量檢測試劑盒 20次
食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)體液尿素比色法定量檢測試劑盒 20次
食蟹猴 Layilin / LAYN 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)細胞D-葡萄糖激法定量檢測試劑盒 20次
食蟹猴 Layilin / LAYN 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)組織D-葡萄糖激法定量檢測試劑盒 20次
食蟹猴 Osteoprotegerin / TNFRSF11B 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)血液D-葡萄糖激法定量檢測試劑盒 20次
食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)體液D-葡萄糖激法定量檢測試劑盒 20次
食蟹猴 IL10RA 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)細胞D-葡萄糖氧化法定量檢測試劑盒 20次
食蟹猴 IFNA13 / Interferon alpha-13 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)組織D-葡萄糖氧化法定量檢測試劑盒 20次
食蟹猴 IFNA2 / Interferon alpha 2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)血液D-葡萄糖氧化法定量檢測試劑盒 20次