細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
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產(chǎn)品名稱(chēng) | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | BJ-X97370 |
商品屬性：
名稱(chēng) 腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 2.組織來(lái)源：腦動(dòng)脈組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 人腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腦動(dòng)脈組織；腦動(dòng)脈有成對(duì)的頸內(nèi)動(dòng)脈和椎動(dòng)脈互相銜接成動(dòng)脈循環(huán)；靜脈系多不與同名動(dòng)脈拌行，所收集的靜脈血先進(jìn)入靜脈竇再匯入頸內(nèi)靜脈；各級(jí)靜脈都沒(méi)有瓣膜，它包括腦的動(dòng)脈系統(tǒng)和腦的靜脈系統(tǒng)。腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞主要功能：①維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡；②合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)；③維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡。 5.方法簡(jiǎn)介： ()實(shí)驗(yàn)室分離的人腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-混合消化法并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： ()實(shí)驗(yàn)室分離的人腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-H115 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
人抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原抗體(RANA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人白介素5受體alpha(IL5RA)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
犬前列腺素F2α(PGF2α)免疫試劑盒*直銷(xiāo)
雞腎上腺素(EPI)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
大鼠蛋白激G(PKG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
羊白介素7(IL7)免疫試劑盒*直銷(xiāo)
煌綠黃胺瓊脂 英文名稱(chēng)：Brilliant Green Agar w/Sulfadiazine 產(chǎn)品規(guī)格：250g
血液增菌培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：Blood En?
腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞Cymbidium Ringspot Virus(CymRSV)蘭花環(huán)斑病毒PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CENPA 著絲粒蛋白A 規(guī)格: 0.1mlFactor H 補(bǔ)體因子H抗體 規(guī)格: 0.2ml
Radix morindae officinalis巴戟天PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周VANGL2 神經(jīng)管畸形相關(guān)蛋白VANGL2抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-GRM2/GLUR2(Tyr876) 磷酸化促代謝型谷受體2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Streptococcus sui豬鏈球通用LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 1-2周phospho-CTNNBIP1 (Ser36) 磷酸化β鏈接素相互作用蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1mlCKMT2 肌酸磷酸激2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Yellow Fever Virus( vaccine strain,17D)黃熱病病毒疫苗株17D 探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周GCMA/GCM1 絨毛膜特異性轉(zhuǎn)錄因子GCMa抗體 規(guī)格: 0.2mlConnexin-32 間隙連接蛋白32抗體 規(guī)格: 0.1ml
Cortex meliae苦楝皮染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周APOA4 載脂蛋白A4抗體 規(guī)格: 0.2mlRRAGA RAS相關(guān)GTP結(jié)合蛋白A抗體 規(guī)格: 0.2ml
Capillaria contorta捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲(chóng)LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周SLAMF9/CD2F-10 CD2F-10抗體 規(guī)格: 0.2mlBAALC 腦和急性白胞漿蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Staphylococcus sciuri松鼠葡萄球探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Neurogenin 2/NGN2 神經(jīng)元素2抗體 規(guī)格: 0.1mlCTAGE4 皮膚T細(xì)胞相關(guān)抗原4抗體 規(guī)格: 0.2ml
Radix curcumae郁金探針?lè)≒CR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周FIS1/TTC11 線粒體裂變1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlCD11b/Integrin αM/Integrin Alpha M 整合素αM/巨噬細(xì)胞表面分子抗體 規(guī)格: 0.1ml
Chicken Infectious Anemia Virus(CIAV)雞傳染性貧血病毒LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周T7 tag T7 tag標(biāo)簽抗體 規(guī)格: 0.1mlCIP2A/p90 Autoantigen 蛋酸PP2A抑制蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Caprine Herpesvirus 2(CpHV-2)山羊皰疹病毒2型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CXXC5 二硫鍵氧化還原鋅指蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-SRC-3 (Thr24) 磷酸化類(lèi)固醇受體輔助活化因子-3 規(guī)格: 0.1ml
