實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
豬鏈球菌型PCR熒光定量檢測試劑盒 | Streptococcus sui2PCR | 多種規(guī)格 | BJ-P7351 |
特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲存條件:-20℃以下,有效期12個月。
二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設立一個專用的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
|
操作流程
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心。
5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在一次使用應全部轉移至標本準備區(qū),并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
Hepatitis C Virus(HCV)丙型肝炎病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Cecropin 抗菌肽/天蠶素抗體 規(guī)格: 0.2ml
Porcine Teschovirus(PTV)豬捷申病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周MEK6 絲裂原活化蛋白激MKK6抗體 規(guī)格: 0.1ml
Fructus aristolochiae馬兜鈴LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周GDIA1 瘤轉移抑制基因GDIA1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Fowl Adenovirus(FAdV-D)禽腺病毒D型LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周AFP(A2) 甲胎蛋白單克隆抗體(包被) 規(guī)格: 0.1ml
Mycoplasma mycoides cluster絲狀支原體簇探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-horse IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗馬IgG 規(guī)格: 0.1ml
Coconut Cadang-Cadang Viroid(CCCVd)椰子死亡類病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周PHD2 脯羥化2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Peste Des Petits Ruminants Virus Virulent Strain (PPRV-Virulent)小反芻獸疫病毒野毒株染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用) 50次 低溫 負20度 一年 2-4周FAM50A FAM50A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Leishmania major碩大利什曼原蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Sulfatase 2 硫酸酯2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Penicillium patulum展開青霉探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-ROCK2(Thr396) 磷酸化Rho相關蛋白激2抗體 規(guī)格: 0.1mlDnmt3 Beta DNA甲基轉移-3β抗體 規(guī)格: 0.2ml
Fructus sophorae槐角染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周MCSF/M-CSF 巨噬細胞克隆刺激因子抗體 規(guī)格: 0.1mlFAM78B FAM78B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
豬鏈球菌型PCR熒光定量檢測試劑盒過氧化氫酶(CAT)檢測試劑盒(鉬酸銨微板法) 100T
過氧化氫酶(CAT)檢測試劑盒(鉬酸銨比色法) 50T|100T
過氧化氫酶(CAT)檢測試劑盒(紫外微板法) 100T
過氧化氫酶(CAT)檢測試劑盒(紫外比色法) 100T
過氧化氫(H2O2)檢測試劑盒(硫酸鈦微板法) 100T
過氧化氫(H2O2)檢測試劑盒(硫酸鈦比色法) 50T
超氧陰離子自由基檢測試劑盒(磺胺微板法) 100T
植物根系活力檢測試劑盒(萘胺微板法) 100T
植物根系活力檢測試劑盒(萘胺比色法) 60T
植物根系(脫氫酶)活力檢測試劑盒(TTC比色法) 40T
植物根系活力定性檢測液(TTC法) 2×100ml|2×500ml