培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
中文名稱:硼酸洋紅染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號:FS-X9897
產(chǎn)品介紹:
用途: 硼酸洋紅染色液主要用于花粉、動植物組織切片等樣本中細(xì)胞核的染色,亦可用于線粒體的染色 注意事項: 又稱格林額史氏硼酸洋紅染色液,主要由高濃度硼酸、洋紅(也稱胭脂紅)等組成,pH呈酸性 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
平滑假絲酵母精加壓受體2抗體Human KLF17 小鼠腎損傷分子1(Kim-1)免疫試劑盒
香蕉骨架肌動蛋白樣蛋白3抗體Human KIF1C 小鼠腎前體免疫試劑盒
靈芝(紅芝, 赤芝)膜粘連蛋白8抗體Human KIF22 小鼠腎(Renin)免疫試劑盒
泰塔溫沙壤土桿菌水通道蛋白8抗體Human KIF20A 小鼠腎上腺髓質(zhì)(ADM)免疫試劑盒
中慢生華癸根瘤菌錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白40抗體Human KIF1B 小鼠腎上腺能a1A受體(ADRA1A)免疫試劑盒
肉梭菌 C型凋亡抑制因子5抗體Human KIF26B 小鼠腎上腺(EPI)免疫試劑盒
炭黑曲霉水通道蛋白-3抗體Human KIF2A 小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)免疫試劑盒
芽胞桿菌載脂蛋白D抗體Human KIF1B 小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)免疫試劑盒
釀酒酵母丁?;铣?/span>3抗體Human KIF1C 小鼠神經(jīng)型一氧化氮合成(nNOS/NOS1)免疫試劑盒
黃溶鏈霉菌脂肪源性亮基肽抗體(血管內(nèi)皮生長因子誘導(dǎo)蛋白)Human KIF19 小鼠神經(jīng)粘附分子1(NCAM1)免疫試劑盒
大豆慢生根瘤菌線粒體凋亡誘導(dǎo)因子2抗體Human KIF20A 小鼠神經(jīng)特異性烯化(NSE)免疫試劑盒
食砜節(jié)桿菌ABL2蛋白抗體Human KIF26B 小鼠神經(jīng)肽Y(NPY)免疫試劑盒
糖多孢菌血管緊張轉(zhuǎn)換ACE1抗體Human KIF22 小鼠神經(jīng)絲蛋白L(NF-L)免疫試劑盒
黑根霉血管緊張轉(zhuǎn)換2抗體Human KIF2B 小鼠神經(jīng)生長因子前體(proNGF)免疫試劑盒
大豆慢生根瘤菌Acinus抗體Human KIF2C 小鼠神經(jīng)生長因子(NGF)免疫試劑盒
副豬嗜血桿菌醋激1抗體Human KIF2A 小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BS白介37試劑盒新對葉百部堿
: ATCC12291資源名稱: 假腸膜明串珠菌 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR白介35試劑盒小蕓木
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR白介33試劑盒薟精
硼酸洋紅染色液松杉靈芝 4'-溴乙酰苯肌動蛋白抗體IgA
枯草芽孢桿 3,5-二-4-氟苯腎上腺髓質(zhì)前體
相思根瘤 2,5-二氟-4-甲結(jié)構(gòu)特異性核FEN1
類芽孢桿屬 (R)-(+)-1,2,3,4-四氫異喹啉-3-羧狂犬病IgM抗體
枯草芽孢桿 反式-2-溴-1-茚維生D結(jié)合蛋白
高地芽胞桿 沒食子十八酯狂犬病IgG抗體
耐冷冷桿 異丁(2-苯氧乙基)酯IgG Fc片段
鏈霉 喹啉-6-羧登革熱病IgG抗體
黃皮疣柄牛肝 1,4-氧代氮雜烷-5-酮登革熱病IgM抗體
籬邊粘褶 N-(苯氧基異基)乙Vasorin蛋白
綠色木霉=木木霉 促進(jìn)劑DTDMT 鈣粘蛋白
暗孢節(jié)菱孢 3-苯甲酯白介1受體樣1
韓國梅奇酵母 1-芐基-4-甲甲酯周期依賴性激1
金龜子綠僵 2-乙基乙己酯骨骼肌受體酪激
短芽胞桿 1-溴-3,5二苯基苯甲羥戊激
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)