特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
肉毒梭狀芽孢桿菌熒光定量PCR試劑盒探針法 | Clostridium botulinum | 多種規(guī)格 | BJ-P9419 |
特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
儲(chǔ)存條件：-20℃以下，有效期12個(gè)月。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項(xiàng) １．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。 ２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。 ３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 ４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 ５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 ７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
|
操作流程
1. 整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
10mL β- 巰基乙醇，蛋白級(jí) β-Mercaptoethanol，Protein Grade 常溫保存
2 ug pVL1392-XylE pVL1392-XylE 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
100次 中草藥DNAout Herbal DNAOUT 常溫
2 ug pENTR-GFP pENTR-GFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
BBL液體培養(yǎng)基 BBL Liquid Medium 250g
5g 傘形酮 Umbelliferone 室溫保存
50T 豬乙型腦炎病毒PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
25 T 超微量ATP測試盒(測Na+K-ATPase) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
500mL Locke’s Solution Locke’s Solution 常溫保存
1mL LAMP可見光染料 LAMP Visible Dye -20℃保存
2 ug pLVX-AmCyan1-C1 pLVX-AmCyan1-C1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
肉毒梭狀芽孢桿菌熒光定量PCR試劑盒探針法大鼠 EMC3 基因全長ORF克隆大鼠Kelch樣ECH相關(guān)蛋白1(KEAP1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
大鼠 MCM6 基因全長ORF克隆大鼠I型膠原(COL1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
大鼠 GDI2 基因全長ORF克隆大鼠II型角蛋白,細(xì)胞骨架71(KRT71)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
大鼠 ELF3 基因全長ORF克隆大鼠G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體1(GPBAR1)免疫試劑盒*直銷
大鼠 SPRYD4 基因全長ORF克隆大鼠GTP KRas 免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
大鼠 RGD735065 基因全長ORF克隆大鼠Ghrelin受體(Ghsr)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
大鼠 AADAT 基因全長ORF克隆大鼠GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
大鼠 PDLIM1 基因全長ORF克隆大鼠F-肌動(dòng)蛋白免疫試劑盒*直銷
大鼠 HPRT1 基因全長ORF克隆大鼠FMS樣酪激3配體(Flt3L)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
大鼠 GLUL 基因全長ORF克隆大鼠FMS樣酪激3(Flt3)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
大鼠 SMIM7 基因全長ORF克隆大鼠FK506結(jié)合蛋白12-雷帕相關(guān)蛋白1(FRAP1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
