特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:Cry1A(b/c)基因核酸檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:48T 0.1PCR管
產(chǎn)品貨號(hào):BJP64876
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
定量PCR方法:
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
北豆根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (S)-Amlodipine產(chǎn)品別名: 1,3-環(huán)己二
北美芹素英文名稱: (S)-Amlodipine產(chǎn)品別名: 5-苯甲基D-谷氨酸
北美芹素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tranilast產(chǎn)品別名: 1-甲基-5-甲基吡唑-4-甲
北五加皮苷M;杠柳苷M英文名稱: Tranilast產(chǎn)品別名: 2,3-二氟-4-甲氧基苯甲
北五加皮苷N;杠柳苷N英文名稱: CEFADROXIL產(chǎn)品別名: 1-BOC-4-基哌啶
貝萼皂苷元英文名稱: CEFADROXIL產(chǎn)品別名: 4-苯肼-N-磺酰
貝萼皂苷元-3- O-β-D-吡喃葡萄糖苷英文名稱: Sodium D-pantothenate 產(chǎn)品別名: N-芐基-2-氯乙酰
貝母花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Edoxaban產(chǎn)品別名: 5-氯-3-羥基異噻唑
貝母素甲(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sphondin產(chǎn)品別名: 3-氟苯乙炔
貝母素乙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-Hydroxycoumarin產(chǎn)品別名: 二氟拉松
貝母辛(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-Hydroxycoumarin產(chǎn)品別名: (4-甲氧基苯基)(4-哌啶)甲酮鹽酸鹽
苯甲酰次烏頭原堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lithocholylglycine產(chǎn)品別名: [1,3-二氫-1,3-雙(2,4,6-三基)-2H-咪唑-2-亞基](3-苯基-1H-茚-1
富含絲氨酸/精氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)蛋白抗體 Geniposidic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶6抗體 3,4-Dihydroxybenzoic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶7抗體 3,4-Dihydroxybenzaldehyde 質(zhì)量規(guī)格:≥98%
眼睛和頭發(fā)顏色相關(guān)蛋白FUZ抗體 3,4-Dihydroxybenzaldehyde 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
濾泡型轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/II型慢性淋巴性白血病抗體 Thiamphenicol glycinate HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
磷酸化堿性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體 Ethyl 2,4-dihydroxy-6-methylnicotinate 質(zhì)量規(guī)格:>98%
FAM65B蛋白抗體 Enduracidin 質(zhì)量規(guī)格:BR,含量8%以上
胞外分泌型絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶FAM20C抗體 (+)-Catechin hydrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,進(jìn)分
凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相關(guān)抗原抗體 (+)-Catechin hydrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Cry1A(b/c)基因核酸檢測(cè)試劑盒裂褶菌Anti-COX8A Antibody拉丁屬名: Schizophyllum commune Fr.
木拉克酵母屬Anti-COPS5 Antibody拉丁屬名: Mrakia blollopis
雞痘病Anti-COPS5 Antibody(原貨號(hào)PB0521)拉丁屬名: Fowlpox virus
茶葉枯炭疽盤孢菌*Anti-CPA1 Antibody拉丁屬名: Colletotrichum coccodes
立枯絲核菌Anti-CP Antibody(原貨號(hào)PB0896)僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
環(huán)帶青霉Anti-CPAMD8 Antibody拉丁屬名: Penicillium zonatum
灰平鏈霉菌Anti-CP Antibody(原貨號(hào)PB0897)僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
文昌小單孢菌Anti-CPB2 Antibody拉丁屬名: Micromonospora wenchangensis
產(chǎn)腸素大腸埃希氏菌Anti-CPT2 Antibody拉丁屬名: Escherichia coli ETEC O126:K71