產(chǎn)品介紹:
英文名稱(chēng):Colchicine 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|200mg|500mg Colchicine是一種tubulin抑制劑及微管microtubule干擾劑。Colchicine誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):64-86-8 純度:99.56% 分子量:399.44 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱(chēng):tubulin抑制劑(微管干擾劑)
英文名稱(chēng):Colchicine
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|200mg|500mg
貨號(hào):FS-X10392
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
芽孢桿菌屬8-羥基鳥(niǎo)DNA糖基化Anti-Mouse CD8 alpha DyLight 488 conjugated Antibody肥胖抑制(Obestatin)
腫大地桿菌嗅覺(jué)受體家族10亞基J3抗體Anti-Mouse CD62P DyLight 488 conjugated Antibody肥大類(lèi)(MCT)
地霉雙足囊菌嗅覺(jué)受體家族2亞基4抗體Anti-human Transferrin Antibody非小肺癌相關(guān)抗原211(CA211)
棒狀乳桿菌棒狀亞種嗅覺(jué)受體家族5亞基3抗體Anti-ABAT Antibody非小肺癌抗原(LTA)
細(xì)鏈格孢外致密纖維蛋白3B抗體Anti-AAMP Antibody(PB0088)非神經(jīng)元性烯化(NNE)
氣生鞘單胞菌骨鈣蛋白/骨鈣抗體Anti-ABCA1 Antibody非甲基化寡核(NON)
三葉草根瘤菌固生蛋白3抗體Anti-ABCA4 Antibody芳香烴受體(AhR)
枯草芽孢桿菌腫瘤/抗原135抗體Anti-ABCB1 Antibody泛連接(E3/UBPL)
空腸彎曲桿菌骨誘導(dǎo)因子抗體Anti-ABCA4 Antibody泛結(jié)合(E2/UBCE)
多主棒孢八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子6抗體Anti-ABCA1 Antibody泛激活(E1/UBAE)
柑桔青霉少突膠質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子2抗體Anti-ABCA4 Antibody泛分解(DUB)
蛹蟲(chóng)草水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體Anti-ABCB1 Antibody泛蛋白D(UBD)
細(xì)交鏈孢菌骨硬化病相關(guān)跨膜蛋白1抗體Anti-ABCB1 Antibody泛蛋白(Ub)
ppic9K類(lèi)粘蛋白2抗體Anti-ABCB10 Antibody反狀腺原(rT3)
美澳型核果褐腐病菌胚胎干關(guān)鍵蛋白抗體Anti-ABCB11 Antibody(PB0379)法尼基二磷法尼基轉(zhuǎn)移1(FDFT1)
粟酒裂殖酵母骨保護(hù)蛋白/護(hù)骨抗體Anti-ABCB5 Antibody法尼X受體(FXR)
南極微球菌Micrococcus│antarcticus 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
根霉Rhizopus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
ATCC17056=DSM6770=JCM21220=LMG3935=NBRC103155資源名稱(chēng): 死海色鹽桿菌 質(zhì)量規(guī)格:0.99
tubulin抑制劑(微管干擾劑)磚紅鐮刀 鎘試劑P53蛋白
紅緣擬層孔 7-N-甲基-D-天門(mén)冬(NMDA)受體亞單位NR2B
解淀粉芽孢桿解淀粉亞種 噴他丁戊肝抗原
紫晶臘蘑 4-戊炔-1-蘭尼定受體1
史氏芽胞桿 香葉基去乙酰化
Sphingopyxis ummariensis 反,反-1,4-二苯基-1,3-丁二烯p-Bad
泡盛曲霉 度芬嗜鉻瘤
釀酒酵母 7-溴-1H-吲唑模型腦組織耐藥蛋白癌耐藥蛋白
釘斑鏈霉 5-溴-1H-吲唑有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)肽
根瘤 2-溴-6-OAYP1B1
粉紅鐮孢 4-羥基甲狀旁腺
孢小克銀漢霉 苯并[b]噻吩-3-羧CD20分子
大腸埃希氏 縮水甘油糠維生D
蘇云金芽孢桿以色列亞種 松弛H羥基類(lèi)固脫氫
藤黃微球 4-溴-2,6-二氟苯甲一氧化氮合成