沉降菌監(jiān)測(cè)的操作方法與注意事項(xiàng)！
沉降菌監(jiān)測(cè)的操作方法與注意事項(xiàng)！
一、方法
《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測(cè)試方法》（GB/T16294-2010）
沉降法：通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿中，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下使其繁殖到可見菌落并進(jìn)行計(jì)數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來(lái)判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此評(píng)定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。
二、沉降皿
沉降皿：直徑90mm*15mm
培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊脂（TSA）
沙氏瓊脂（SDA）
培養(yǎng)條件：同浮游菌監(jiān)測(cè)
培養(yǎng)基質(zhì)量：
應(yīng)符合2015年版《中國(guó)藥典》中“（1921）藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則”的相關(guān)要求。
1）培養(yǎng)基制備要求
2）培養(yǎng)基貯藏要求
3）培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗(yàn)
用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行的預(yù)培養(yǎng)以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
關(guān)鍵問(wèn)題：暴露蒸發(fā)失水，會(huì)降低培養(yǎng)基的某些微生物的生長(zhǎng)。
單向氣流暴露4小時(shí)，TSA版失重16%
為了延長(zhǎng)暴露和培養(yǎng)基的時(shí)間，同時(shí)確保平皿仍然提供可靠的結(jié)果，沉降皿可以澆注到一個(gè)特定的高澆注線。
包裝：通常是雙重或三重包裝，這取決于潔凈室的級(jí)別。外層包裝進(jìn)入下一個(gè)高級(jí)別的潔凈室中之后被移除。對(duì)于*（ISO5級(jí)）潔凈室和隔離器，三層透明包裝時(shí)合適的。
隔離器的沉降皿：內(nèi)層的包裝材料必須是過(guò)氧化氫蒸汽不可滲透的，以確保這種常用的消毒劑不會(huì)轉(zhuǎn)移的培養(yǎng)基上，采樣后抑制微生物生長(zhǎng)，使用為隔離器設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。
三、監(jiān)測(cè)
1）人員的清潔、消毒和著裝
2）在溫度、濕度、壓力的測(cè)試之后進(jìn)行
3）明確測(cè)試狀態(tài)，靜態(tài)測(cè)試人員不得多于2人，一般應(yīng)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)
4）開啟凈化空調(diào)系統(tǒng)
單向流、靜態(tài)10min以上，非單向流30min以上
5）少采樣點(diǎn)數(shù)
注：*（單向流）面積指送風(fēng)口表面積；任何小的潔凈區(qū)采樣點(diǎn)不得少于2個(gè)。
6）采樣位置：
離地面0.8-1.5m左右，高于工作面
關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵區(qū)域，可增加采樣點(diǎn)
7）采樣次數(shù)：每個(gè)點(diǎn)1次
8）采樣時(shí)間：靜態(tài)30分鐘；動(dòng)態(tài)4小時(shí)
單碟暴露時(shí)間可以少于4小時(shí)，同一位置可使用對(duì)個(gè)沉降碟連續(xù)進(jìn)行監(jiān)測(cè)并累積計(jì)數(shù)。
9）少培養(yǎng)皿數(shù)：
四、注意事項(xiàng)
1）采取一切措施防止采樣污染和其他人為對(duì)樣本的污染。
2）采樣注意事項(xiàng)：同懸浮粒子監(jiān)測(cè)
3）培養(yǎng)基質(zhì)量
4）陰性對(duì)照試驗(yàn) 每次或每個(gè)區(qū)域取1個(gè)對(duì)照培養(yǎng)皿
5）日常監(jiān)測(cè)：*區(qū)及無(wú)菌隔離系統(tǒng)采樣點(diǎn)數(shù)目應(yīng)不小于3個(gè)且每個(gè)采樣點(diǎn)的平皿數(shù)應(yīng)不小于1個(gè)。
五、結(jié)果判斷：
每個(gè)測(cè)點(diǎn)的沉降菌平均濃度必須低于所選定評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)中的界限。
在靜態(tài)測(cè)試時(shí)，若某測(cè)點(diǎn)的沉降游菌的平均濃度超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)重新采樣兩次，兩次測(cè)試結(jié)果均合格才能判為符合。
六、限度的理解：*＜1cfu/碟
舉例：監(jiān)測(cè)了左中右3個(gè)位置，1碟/位置
不合格結(jié)果：3個(gè)沉降碟平均菌落數(shù)≥1cfu
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