冷凍干燥菌種的轉(zhuǎn)接技術(shù)！
冷凍干燥菌種的轉(zhuǎn)接技術(shù)！
建議用下列方法恢復(fù)培養(yǎng)冷凍干燥保藏的菌種。
一、安瓶管開(kāi)封
1．用浸過(guò)70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。
2．用火焰將安瓿管頂端加熱。
3．滴無(wú)菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開(kāi)裂。
4．用挫刀或鑷子敲下已開(kāi)裂的安瓿管的頂端。
二、菌株恢復(fù)培養(yǎng)
1．用無(wú)菌吸管，吸取0.3～0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴人安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍于菌體溶解呈懸浮狀。
2．取0.1～0.2ml菌體懸浮液，移植于適宜的瓊脂斜面／平板培養(yǎng)基上，剩余的菌液，注入適宜的液體培養(yǎng)基內(nèi)，然后在建議的溫度下培養(yǎng)。
3．若未能活化，或活化后有疑問(wèn)時(shí)，請(qǐng)于收到菌種1個(gè)月內(nèi)，通知保藏中心，經(jīng)查證無(wú)誤后，即免費(fèi)補(bǔ)寄。
三、注意事項(xiàng)
1．菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6一10的環(huán)境下。
2．厭氧菌的培養(yǎng)，如無(wú)特別說(shuō)明，自開(kāi)封至接種完成，均需以無(wú)氧氣體充填，以保持厭氧狀態(tài)。
3．某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)，此時(shí)請(qǐng)將步驟二(2)重復(fù)一次。
四、液氮超低溫保藏程序
1、容器的選擇：使用帶螺旋蓋的2ml塑料安培瓶。
2、檢查安培瓶是否滲漏：用0.05%的亞甲基藍(lán)水溶液在4浸泡30-45分鐘，沖洗干凈，棄去含有藍(lán)色染料的安培瓶，其余的安培瓶備用。
3、打印標(biāo)簽(激光打印)。
4、容器的滅菌：先用蒸餾水漂洗干凈安培瓶，再用蒸餾水在滅菌鍋中121浸泡滅菌15分鐘，干燥并將打印好的標(biāo)簽放入安培瓶中，略擰緊螺旋蓋，再行121滅菌30分鐘。
5、保藏菌菌齡：處于大生長(zhǎng)量階段或?qū)?shù)生*后期。
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