LB培養(yǎng)基的使用原理與配制方法！
LB培養(yǎng)基的使用原理與配制方法！
培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料。那么LB培養(yǎng)基是什么培養(yǎng)基？LB一般被解釋為Luria-Bertani，然而根據(jù)其發(fā)明人貝爾塔尼(Giuseppe Bertani)的說法，這個名字來源于英語lysogeny broth，即溶菌肉湯。LB培養(yǎng)基是近年來用于培養(yǎng)基因工程受體菌(大腸桿菌)的常用培養(yǎng)基之一。
LB培養(yǎng)基是一種培養(yǎng)基的名稱，是微生物學(xué)實驗中用的培養(yǎng)基，生化分子實驗中一般用該培養(yǎng)基來預(yù)培養(yǎng)菌種,使菌種成倍擴(kuò)增,達(dá)到使用要求.可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。
LB培養(yǎng)基是一種應(yīng)用泛和普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時又稱普通培養(yǎng)基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。
酵母提取物：酵母經(jīng)破壁后將其中蛋白質(zhì)、核酸、維生素等抽提，再經(jīng)生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、維生素等天然活性成分的淡黃色粉末，其中氨基酸含量30%以上，總蛋白50%以上，核苷酸10%以上，廣泛用作生物培養(yǎng)基和食品調(diào)味品制造原料。
胰化蛋白胨：一種優(yōu)質(zhì)蛋白胨，是以新鮮牛肉和牛骨經(jīng)*消化，濃縮干燥而成的白色粉末，含有豐富的氮源、氨基酸等。
酵母提取物為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽、生長因子、維生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生長環(huán)境(如滲透壓)，其次是提供無機(jī)鹽。
在配制固體培養(yǎng)基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下96℃時溶化，一般實際應(yīng)用時在沸水浴中或墊以石棉網(wǎng)直接煮沸溶化。瓊脂在40℃時凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同。
由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細(xì)菌，因此，要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長繁殖。
LB培養(yǎng)基用途
用于一般細(xì)菌培養(yǎng)，特別用于分子生物學(xué)試驗中大腸桿菌的保存和培養(yǎng)。
LB培養(yǎng)基使用原理
蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、維生素和生長因子;維持均衡的滲透壓;葡萄糖提供碳源;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
LB培養(yǎng)基配制方法
配制每升培養(yǎng)基，應(yīng)該在950 ml去液態(tài)lb培養(yǎng)基離子水中加入：胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 搖動容器直至溶質(zhì)溶解。用5mol/LNaOH調(diào)pH至7.0。用去離子水定容至1L。在15psi高壓下蒸汽滅菌20min。
LB固體培養(yǎng)基1L和液體一樣，加15g瓊脂粉，一定要在溫度降下之前加好抗固態(tài)LB培養(yǎng)基生素，并且倒好板。
LB固體培養(yǎng)基倒板
⒈配制：100ml LB培養(yǎng)基加入1.5g瓊脂粉。
⒉抗生素的加入：高壓滅菌后，將融化的LB固體培養(yǎng)基置與55℃的水浴中，待培養(yǎng)基溫度降到55℃時(手可觸摸)加入抗生素，以免溫度過高導(dǎo)致抗生素失效，并充分搖勻。
⒊倒板：一般10ml倒1個板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后，打開蓋子，在紫外下照10-15分鐘。
⒋保存：用封口膠封邊，并倒置放于4℃保存，一個月內(nèi)使用。 配400ml的話成分按比例減少就行了，pH還是要按規(guī)定的。
LB培養(yǎng)基設(shè)計不同的離子對大腸桿菌生長狀況的影響
以下方法僅供參考：
⒈首先養(yǎng)幾個平板固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的大腸桿菌，保證這些細(xì)菌來自于同一個克隆;
⒉采用液體培養(yǎng)并用分光光度計測定濁度來評價大腸桿菌生長。
⒊鹽可選擇氯化鎂、氯化鋅、銨鹽、磷酸鹽等;
⒋濃度差別可做，可不做;
⒌因為分光光度計的準(zhǔn)確性有一定要求，培養(yǎng)時間就不能太長，多8小時;
根據(jù)這些條件設(shè)計實驗就容易了。大體上是，先配制好各種液體培養(yǎng)基;然后從1中挑一個菌落放到一個起始的基本LB液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)到稍微有點渾時，就可以向各種培養(yǎng)基中加同樣體積的細(xì)菌;后就是測定OD值了。記得每個培養(yǎng)基做3個重復(fù)管。
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