蘇云金桿菌的部分生化試驗鑒定方法！
蘇云金桿菌的部分生化試驗鑒定方法！
一、目的要求：
應用生物化學技術對昆蟲病原細菌進行鑒定，乃是一種十分簡便快速的方法，鑒定蘇云金桿菌的生化指標是：V、P反應，*酶，蛋白水解，吐溫酶，水楊素，七葉靈、蔗糖、甘露糖、表膜、酶、淀粉、幾丁質酶、*脫羥酶等。本實驗是通過簡單的生化測定來了解蘇云金桿菌的生化鑒定技術。
二、實驗材料：
天平、電爐、藥勺、量筒、燒杯、pH試紙7、高壓鍋（手提式）、接種環(huán)
三、實驗內容：
⒈各種糖利用：
蛋白胨 1%，瓊脂 2%，蔗糖（甘露糖）1%，水楊素 0.5%，1%酸性復紅水溶液 0.5%。
蛋白胨加熱溶于水中，加入酸性復紅水溶液。分別加入一種糖加熱溶解，以不加糖的蛋白胨作對照。分裝試管，調pH至7.58，滅菌30分鐘。接種后于30恒溫培養(yǎng)檢查產(chǎn)酸情況，若培養(yǎng)基變紅者為正反應。
⒉七葉靈利用：
1%，七葉靈 0.5%，瓊脂 2%，另配5%三氯化鐵水溶液單獨滅菌。
培養(yǎng)基溶后，先將三氯化鐵每皿滴入2滴，后倒平板混勻。凝固后電接菌種，30 培養(yǎng)3-5天。菌苔周圍出現(xiàn)深褐色區(qū)為陽性反應。
⒊淀粉水解試驗：
5克，NaCl 5克，可熔性淀粉 5克，瓊脂 10克，蒸餾水 1000毫升。
將試驗菌點種于平板上，徒長出菌落后，收Lugoc氏碘液傾注于平板表面，菌落四周有透明圈者為陽性放應。
⒋V、P反應：
蛋白胨5克，葡萄糖5克，NaCl 5克，蒸餾水 1000毫升；分裝試管 30分鐘滅菌。
接菌后于37 培養(yǎng)24小時，每管加入4%KOH溶液10-20滴，再加等量的5%的一萘酚乙醇水溶液后，用力振蕩。然后置37 下保溫0.5小時。培養(yǎng)物出現(xiàn)紅色即為V、P正反應，并設未接種的試管為對照。
⒌*酶試驗：
蛋白胨1%，酵母膏 0.3%，NaCl 0.5%，瓊脂 2%，卵黃2-3%， pH 7-7.2。
用75%酒精將新鮮雞蛋進行表面消毒，并用經(jīng)火焰滅菌的鑷子將蛋兩端各打一個孔，傾去蛋清，然后用無菌5ml吸管取出卵黃，加至觸化后冷卻至50。C左右的培養(yǎng)基中，使卵黃含量為培養(yǎng)基總體積的2~3%。混勻后倒平板，點接菌種24小時后觀察，菌液邊緣出現(xiàn)混濁圈者表示卵鱗酯酶為陽性。
⒍菌膜形成試驗：
肉湯試管接種，30靜止培養(yǎng)24小時后觀察菌膜形成情況及搖動后膜破粹情況。
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