細胞轉(zhuǎn)染實驗的方法有哪些不同？
細胞轉(zhuǎn)染實驗的方法有哪些不同？
⒈DEAE-葡聚糖
這是早在1965年出現(xiàn)的轉(zhuǎn)染方法。帶正電的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚體可以結(jié)合帶負電的DNA分子，使得DNA復(fù)合物結(jié)合在帶負電的細胞表面。通過使用DMSO或甘油獲得的滲透休克，也可能是細胞內(nèi)吞作用使得DNA復(fù)合體進入細胞。DEAE-葡聚糖于瞬時轉(zhuǎn)染，可重復(fù)性好，轉(zhuǎn)染時要除掉血清。
⒉磷酸鈣共沉淀轉(zhuǎn)染
早在1973年開始采用。氯化鈣+DNA+磷酸緩沖液按一定的比例混和，形成極小的磷酸鈣-DNA復(fù)合物沉淀黏附在細胞膜表面，借助內(nèi)吞作用進入細胞質(zhì)。沉淀顆粒的大小和質(zhì)量對于轉(zhuǎn)染的成功至關(guān)重要。pH值、鈣離子濃度、DNA濃度、沉淀反應(yīng)時間、細胞孵育時間乃至各組分加入順序和混合的方式都可能對結(jié)果產(chǎn)生影響，重復(fù)性不佳。此法較易得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，但轉(zhuǎn)染原代細胞比較困難。
⒊電穿孔法
通過短暫的高電場電脈沖處理細胞，沿細胞膜的電壓差異會導(dǎo)致細胞膜的暫時穿孔。DNA被認(rèn)為是穿過孔擴散到細胞內(nèi)的。電脈沖和場強的優(yōu)化對于成功的轉(zhuǎn)染非常重要，因為過高的場強和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細胞膜而裂解細胞。理論上說電穿孔法可用于各種細胞，且不需要另外采購特殊試劑，但需要昂貴的電轉(zhuǎn)儀。此法每次轉(zhuǎn)染需要更多的細胞和DNA，因為細胞的死亡率高。每種細胞電轉(zhuǎn)的條件都需要進行多次優(yōu)化。
⒋脂質(zhì)體法
中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細胞膜內(nèi)。帶正電的陽離子脂質(zhì)體則不同，DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細胞。脂質(zhì)體法始于1987年，此法的出現(xiàn)使得轉(zhuǎn)染效率、轉(zhuǎn)染的穩(wěn)定性和可重復(fù)性大大提高。陽離子脂質(zhì)體細胞毒性相對較高，對不同的細胞可能會干擾細胞的代謝。
⒌病毒介導(dǎo)的感染
感染需要將目的基因克隆到特定的病毒體系中，經(jīng)過包裝細胞的包裝得到改造后的病毒，再進行感染。優(yōu)點是轉(zhuǎn)染效率特別高，尤其是難以轉(zhuǎn)染的原代細胞、活體細胞。缺點是構(gòu)建病毒周期長，環(huán)節(jié)多，易出錯，費用也高。
⒍非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
好的納米聚合物轉(zhuǎn)染試劑，如Entranster試劑，納米材料，細胞毒性小，轉(zhuǎn)染效率高，漸漸成為各大實驗室的轉(zhuǎn)染試劑。
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