Celigo的典型圖像如下: 其次,在這種成像精度下,如何實(shí)現(xiàn)對1536孔,384孔,96孔,24孔,甚至6孔板的全孔成像呢?這涉及到其采用的一個光學(xué)技術(shù),應(yīng)用一個大型的F-theta透鏡和電磁檢流計(jì)鏡片來對全孔進(jìn)行大面積快速掃描。其技術(shù)原理圖如右。在該技術(shù)下,透鏡的位移由電磁推動,安靜快速而沒有機(jī)械位移,其精度可小于1um,從而保證了后續(xù)的多圖像拼接保持了一致性。 這就帶來了細(xì)胞大規(guī)模圖像分析的幾個好處: ☆ 原位in situ ☆ 全孔 full well ☆ 全孔照明亮度的均一。這是由于掃描光路的特性帶來的。圖像見下: ☆ 快速。這是系統(tǒng)的掃描光路電磁透鏡技術(shù)帶來的。其處理全孔高精度圖像分析下的處理速度如下: ☆ 整板whole plate ☆ 多通道m(xù)ulti channels Celigo能做什么? ☆ 基于高質(zhì)量明場的細(xì)胞生長分析 Label-free assays 靈活的分析軟件設(shè)計(jì)可以通過兩種分析方法獲取細(xì)胞增殖曲線。 ☆ 基于熒光通道的細(xì)胞功能分析Fluorescence assays 應(yīng)用舉例: 細(xì)胞增殖(DNA合成)Cell Proliferation(DNA Synthesis) 設(shè)門數(shù)據(jù) 克隆形成Colony Formation 細(xì)胞遷移(損傷修復(fù))Cell Migration(Wound Healing) 熒光蛋白表達(dá)Fluorescence Proteins 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染不同濃度的編碼turbo-GFP的質(zhì)粒到Hela細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后多個時(shí)間點(diǎn)分析96孔板中GFP陽性表達(dá)率,GFP陽性細(xì)胞數(shù),以及死細(xì)胞(PI標(biāo)記)的百分比。 3D腫瘤球分析3D Tumor Speroid 17-AAG和PI-103濃度依賴性的腫瘤球生長抑制。 (a) 細(xì)胞接種、加藥、Celigo成像和分析流程圖;(b-g) 不同藥物濃度對腫瘤球生長的抑制情況。 細(xì)胞重編程iPSC Reprogramming 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞通過Yamanaka方法誘導(dǎo)生成iPSC,通過Celigo掃描6孔板檢測和分析iPSC克隆形成情況。 誘導(dǎo)后的多能干細(xì)胞通過Celigo檢測特異性多能干細(xì)胞的標(biāo)記(OCT4,SSEA4)。
在細(xì)胞生長的過程中無需消化細(xì)胞,無需取樣,無需進(jìn)行任何處理,可在任何時(shí)間點(diǎn)隨時(shí)成像,隨時(shí)分析,隨時(shí)獲得統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理結(jié)果。
如6孔板一個孔的完整細(xì)胞圖像,由256張細(xì)胞圖像拼接而成;96孔板一個孔的完整細(xì)胞圖像,由16張細(xì)胞圖像拼接而成。由于每個孔均是高清晰度的全孔細(xì)胞分析,從而保證了統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的一致性。(孔與孔之間由于細(xì)胞加樣量的差異,細(xì)胞生長的差異,懸浮沉降細(xì)胞移動導(dǎo)致的固定小視野不能準(zhǔn)確追蹤等問題均得到解決。)Plate Type Images / Well Resolution(mm/pixel) Typical Time (min) 1536 well 1 2 <6 min 384 well 1 2 <2 min 384 well 4 2 <5 min 96 well 16 2 <3.5 min 96 well 16 1 <10 min
整板的全孔圖像預(yù)覽和曲線分析帶來一目了然的細(xì)胞分析結(jié)果,而這一切均在<10min的速度下完成,從而簡單實(shí)現(xiàn)多時(shí)間點(diǎn)的整板細(xì)胞生長分析快速追蹤。
適用于各種規(guī)格細(xì)胞培養(yǎng)板(6/12/24/96/384/1536孔板)和培養(yǎng)瓶(T-25&T-75)。
共有四個通道,采用四個獨(dú)立的LED光源,包括一個高質(zhì)量的明場通道,和三個熒光通道。標(biāo)配:
- 藍(lán)色熒光:ex/em377/477(e.g., Hoechst, DAPI)
- 綠色熒光:ex/em483/536(e.g., FITC, Calcein, Alexa Fluor 488, GFP)
- 紅色熒光:ex/em531/629 (e.g., PI, Texas Red, Alexa Fluor 568)
選配:可替換以上三個熒光的任一通道
- Far-Red (e.g. Alexa Fluor 647, DRAQ5)
Celigo是一款基于多熒光通道細(xì)胞成像的快速全孔&整板掃描分析儀,因此基于細(xì)胞成像的關(guān)于全孔的細(xì)胞生長監(jiān)測和全孔的細(xì)胞熒光功能檢測的應(yīng)用,都可以選擇Celigo。
細(xì)胞活性(毒性)分析 Cell Viability(Toxicity)
通過Calcein AM/PI/Hoechst33342三種熒光染料分別標(biāo)記活/死/全部細(xì)胞。通過Celigo可輕松獲取全孔&整板細(xì)胞圖像和自動報(bào)告活死細(xì)胞百分比,以及不同組別的對照數(shù)據(jù)。
細(xì)胞圖像數(shù)據(jù)
A.96孔板全孔A549細(xì)胞圖像(BrdU-綠色,DAPI-藍(lán)色);B.局部放大全孔細(xì)胞圖像(DAPI-所有細(xì)胞,BrdU-S期細(xì)胞)
使用Oris Platypus專用損傷修復(fù)板,通過Celigo自動分析明場&熒光通道細(xì)胞數(shù)量或細(xì)胞融合度,獲得損傷修復(fù)/遷移的細(xì)胞增殖情況。
96孔板中掃描全孔Hela細(xì)胞轉(zhuǎn)染后GFP/RFP表達(dá)的情況。
Data courtesy of Kaji Lab, MRC Centre for Regenerative Medicine, University of Edinburgh
干細(xì)胞多能性鑒定Stem Cell Pluripotency