分子間相互作用測(cè)量?jī)xMST
德國(guó)Nano Temper --- 分子間相互作用測(cè)量?jī)xMST
快速、無(wú)需固定、低樣品量、天然溶液、高靈敏度
技術(shù)優(yōu)勢(shì)：
- 快速：在10分鐘之類(lèi)測(cè)量解離常數(shù)
- 高靈敏范圍：從離子和片段結(jié)合到復(fù)合物間作用
- 天然的環(huán)境條件：直接在血清和裂解液中測(cè)量
- 樣品使用量低：pM的濃度下只需<4ul樣品量
- 溶液測(cè)量：不需要固定到固相表面
- 動(dòng)力學(xué)范圍：亞-nM和mM的解離常數(shù)
- 極低消耗費(fèi)、無(wú)維護(hù)費(fèi)、簡(jiǎn)單易操作
實(shí)驗(yàn)流程：很簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)方法，避免了昂貴的樣品消耗和繁瑣的制備過(guò)程。相對(duì)于其他的已有的測(cè)量分子間相互作用的技術(shù)，MST結(jié)合毛細(xì)管使用大大降低所需的實(shí)驗(yàn)成本，并且可以測(cè)量天然狀態(tài)環(huán)境中的生物分子間的相互作用。熒光分子的濃度的保持不變而結(jié)合分子的濃度梯度增加。一個(gè)4ul的樣品量被填充在MST毛細(xì)血管，然后使用制造一個(gè)局部溫度梯度。由于標(biāo)記分子在玻璃毛細(xì)管中的運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致的區(qū)域熒光強(qiáng)度變化就會(huì)被觀(guān)測(cè)到。既可用標(biāo)簽/螢光蛋白來(lái)發(fā)光(NT.115系統(tǒng))，也可以用*自發(fā)熒光來(lái)檢測(cè)(NT.LabelFree系統(tǒng))。熒光分子或顆粒初是自由均勻分布的。在紅外激光照射下，分子收到熱泳動(dòng)的作用力，而移出加熱區(qū)域，后分子在熱泳動(dòng)作用力和質(zhì)量擴(kuò)散作用力下達(dá)到平衡，形成穩(wěn)定態(tài)。在關(guān)閉激光后，分子擴(kuò)散重建均勻分布狀態(tài)。下圖顯示了該過(guò)程。
- 使用熒光染料/熒光蛋白具有良好的選擇性
- 不需要固定，在生物溶液中測(cè)量，無(wú)需純化
- 無(wú)需標(biāo)記測(cè)量
- 極低的樣品消耗量
- 直接在脂質(zhì)體或者去污劑中研究膜蛋白
- 可以在各種不同的溶液環(huán)境中完成測(cè)量，包括研究膜蛋白所需的復(fù)雜的去污劑環(huán)境
- 研究化學(xué)計(jì)量學(xué)并確定生物分子結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)目
- 研快速簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
測(cè)量數(shù)據(jù)方面：
- 10分鐘之內(nèi)測(cè)量任何（生物）分子間親和力(KD, 解離常數(shù))
- 測(cè)量sub-nM到mM 級(jí)的解離常數(shù)
- 可以選擇特定溫度下完成測(cè)量
- 研究各種不同大小的分子：離子、片段、核小體、脂質(zhì)體
- 廣泛的樣品兼容性：天然的環(huán)境中、生理學(xué)實(shí)驗(yàn)條件、血清、細(xì)胞裂解液
- 可以研究多組分反應(yīng)：三元復(fù)合物、裝配順序、干擾因素、協(xié)同作用、類(lèi)似物
- 可以區(qū)分靶標(biāo)上不同的結(jié)合位點(diǎn)
- 可以測(cè)量生物分子的寡聚化
- 研究結(jié)合能量學(xué)ΔG (自由能 ), ΔH (焓) 和ΔS (熵)
- 研究蛋白的折疊和穩(wěn)定性
實(shí)驗(yàn)操作方面：
- 非常簡(jiǎn)單易操作
- 實(shí)時(shí)獲得數(shù)據(jù)
- 非常穩(wěn)定的技術(shù)
維護(hù)費(fèi)用方面：
- 非常低的運(yùn)行成本
- 不需要日常的儀器維護(hù)
- 更快得到數(shù)據(jù)用于發(fā)表文章
- 儀器小型化設(shè)計(jì)，占用空間少
