在Western Bloting實(shí)驗(yàn)中,可能存在總蛋白濃度測(cè)定不準(zhǔn)確,或者蛋白質(zhì)樣品在電泳前上樣時(shí)產(chǎn)生的樣品間的操作誤差;這些誤差可以通過(guò)測(cè)定每個(gè)樣品中實(shí)際轉(zhuǎn)到膜上的內(nèi)參,比如內(nèi)參GAPDH的含量來(lái)進(jìn)行校正。GAPDH(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)是參與糖酵解的一種關(guān)鍵酶,由4個(gè)30-40kDa的亞基組成,分子量146kDa,檢測(cè)條帶大約在36kDa。 GAPDH基因幾乎在所有組織中都高水平表達(dá),廣泛用作Western blot蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參。
如何選擇合適的GAPDH抗體?
內(nèi)參抗體雖然選擇較多,但是也需要遵循一定的原則,并契合實(shí)際的應(yīng)用要求。首先,我們需要考慮目的蛋白的大小,我們*內(nèi)參要與檢測(cè)的目的蛋白的分 子量相差5KD以上,因此你需要根據(jù)你目的檢測(cè)蛋白的分子量來(lái)選擇合適的內(nèi)參,由于GAPDH的檢測(cè)分子量大約在36kD,因此該內(nèi)參抗體不是很適合用于檢測(cè)30kD-40kD大小目標(biāo)蛋白的WB實(shí)驗(yàn)中。另外,不同的組織來(lái)源的樣本在選擇內(nèi)參時(shí)還有一定的區(qū)別。比如某些細(xì)胞中,由于組織缺氧、糖尿病等因素會(huì)導(dǎo)致GAPDH的表達(dá)增高,不適合做內(nèi)參。
因?yàn)闄z測(cè)的目的蛋白分子量在50kD左右,之前的β-Tubulin不是很適合,就購(gòu)買(mǎi)了一支Abbkine的GAPDH抗體做內(nèi)參,效價(jià)確實(shí)有點(diǎn)驚訝,我用1:1000倍起始稀釋覺(jué)得條帶很濃,后來(lái)一直到1:8000稀釋?zhuān)瑫r(shí)減少了曝光時(shí)間,條帶仍然很清晰。——武漢大學(xué)生命*一客戶
產(chǎn)品名稱(chēng)及描述 | 品牌 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品說(shuō)明 |
Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5) | Abbkine | A01020 | 詳情 |
HRP Conjugated Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5) | Abbkine | A01025 | 詳情 |
一般來(lái)說(shuō),內(nèi)參抗體可檢測(cè)的種屬類(lèi)型越多,在使用過(guò)程中的選擇余地就越大;而小鼠源的單克隆抗體一般在特異性、穩(wěn)定性以及效價(jià)都要優(yōu)于多克隆抗體。 另外,抗體的效價(jià)也是考察該抗體性價(jià)比的重要方面,也即相當(dāng)于實(shí)際應(yīng)用時(shí)的稀釋比率。一個(gè)效價(jià)高的100μl GAPDH抗體(假如其WB檢測(cè)的稀釋比率是1:5000,終使用液相當(dāng)于500ml),要比效價(jià)低的1ml的GAPDH抗體(假如 WB檢測(cè)的稀釋比率是 1:200,終使用液相當(dāng)于2ml)性價(jià)比更高。因此在選擇抗體的時(shí)候,不但需要考慮抗體的量,還需要考慮抗體的效價(jià),即不同應(yīng)用的建議稀釋比率。
為什么選擇*Abbkine品牌的GAPDH抗體?
供應(yīng)GAPDH抗體的進(jìn)口品牌有很多,像Abcam、Santa Cruz、Cell Signaling(CST)、Millipore等都有相關(guān)GAPDH抗體提供。但是由于不是專(zhuān)門(mén)的標(biāo)簽和內(nèi)參抗體供應(yīng)商,因此在性價(jià)比上不是優(yōu)的選擇, 以Abcam為例,其一支100μl GAPDH抗體的RMB報(bào)價(jià)為¥4418;CST的一支100μl GAPDH抗體的報(bào)價(jià)是¥2997。
另外,一些國(guó)內(nèi)的供貨商也能提供分裝的GAPDH抗體,但是在品牌和質(zhì)量保障上都有不足。國(guó)產(chǎn)分裝的GAPDH體在質(zhì)量穩(wěn)定性上有不足,并且經(jīng)過(guò)分裝以后,其效價(jià)也有損失。而原產(chǎn)于國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室的GAPDH抗體有些具有較好的檢測(cè)活性,但是在應(yīng)用類(lèi)型上有差距,并且在批次之間的穩(wěn)定性上較難控制,而國(guó)內(nèi)僅有的少量原產(chǎn)抗體也是多克隆抗體。如果您想買(mǎi)到一支性價(jià)比更高,同時(shí)也是*品牌的GAPDH內(nèi)參抗體,那 Abbkine可能會(huì)是您的一個(gè)重要考慮選項(xiàng)之一。我們向您*Abbkine的GAPHD單克隆內(nèi)參抗體Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5)(貨 號(hào)A01020)。
產(chǎn)品名稱(chēng)及描述 | 品牌 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品說(shuō)明 |
Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5) | Abbkine | A01020 | 詳情 |
HRP Conjugated Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5) | Abbkine | A01025 | 詳情 |
該抗體單克隆抗體,克隆號(hào)為2B5。其抗原為同時(shí)具有蛋白特異性和種屬通用性的GAPDH蛋白部分序列,其檢測(cè)種屬非常的廣泛,可識(shí)別人、小鼠、兔、大鼠、猴、狗、雞、豬和綿羊的GAPDH蛋白,也算是一個(gè)真正保守的內(nèi)參抗體。另外,該抗體的效價(jià)非常高,WB實(shí)驗(yàn)*稀釋比率為 1:1000-1:10,000,甚至有客戶報(bào)告更高的稀釋比率。
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Abbkine還提供大包裝1ml的GAPDH內(nèi)參抗體,非常適合經(jīng)常進(jìn)行內(nèi)參驗(yàn)證或校準(zhǔn),或者進(jìn)行細(xì)胞骨架熒 光定位的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)需求。為方便客戶 的使用, 上述產(chǎn)品,Abbkine均在中國(guó)備有現(xiàn)貨。Abbkine針對(duì)中國(guó)市場(chǎng),提供化的產(chǎn)品質(zhì)量追蹤和售后服務(wù)以及保障,如果您在使用過(guò)程中有任何問(wèn)題, 請(qǐng)直接與其當(dāng)?shù)卮砩贪澜菘萍加邢薰尽?/p>
產(chǎn)品名稱(chēng)及描述 | 品牌 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品說(shuō)明 |
Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5) | Abbkine | A01020 | 詳情 |
HRP Conjugated Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5) | Abbkine | A01025 | 詳情 |
美國(guó)Abbkine品牌是一家提供高性價(jià)比免疫學(xué)和細(xì)胞學(xué)科研產(chǎn)品及解決方案的品牌,艾美捷將其引入中國(guó),作為其中國(guó)區(qū)域代理,將為客戶提供性 價(jià)比的常規(guī)免疫學(xué)試劑,如各種標(biāo)簽抗體、內(nèi)參抗體、常規(guī)一抗以及全系列二抗,抗體檢測(cè)底物以及相關(guān)試劑盒等。同時(shí)我們作為多家品牌的的中國(guó)代理或 區(qū)域代理,艾美捷能為您提供系列的實(shí)驗(yàn)室解決方案。如果您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣,請(qǐng)致電免費(fèi)客戶專(zhuān)線到艾美捷科技有限公司垂詢相關(guān)的產(chǎn)品信息及完整實(shí)驗(yàn)解決方案。
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