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實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象。

大鼠 SEP15 基因全長ORF克隆

大鼠 FSTL1 基因全長ORF克隆

大鼠 UQCRC2 基因全長ORF克隆

大鼠 CTSH 基因全長ORF克隆

大鼠 PRRG4 基因全長ORF克隆

大鼠 HMGCL 基因全長ORF克隆

大鼠 DCPS 基因全長ORF克隆

大鼠 ARL1 基因全長ORF克隆

大鼠 ATP6V1C1 基因全長ORF克隆

大鼠 RCN3 基因全長ORF克隆

C6 (大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞)25mg Oligo（dT）纖維素 Oligo (dT) Cellulose 4℃保存 0.156-10 ng/mL 白喉?xiàng)U菌(CD)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

2 ug pSUOER-retro-neo pSUOER-retro-neo 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

50次 柱式細(xì)菌RNAout Column Bacterial RNAOUT 4℃保存酸性肉湯 進(jìn)口、國產(chǎn)Acid Borth用于酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗(yàn)250

PALCAM瓊脂平板（9cm） PALCAM Agar 10個(gè)/包 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Matrix metalloproteinase-9

1 管 SMD1168酵母菌 SMD1168 Yeast Strain -80℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Sphingosine 1-phosphate receptor 5

50T 玉米MON810 PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 15.6-1000 pg/mL 豬藍(lán)耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

250mg 核酸組蛋白 ( 小牛胸腺 ) Nucleohistone From Calf Thymus 4℃保存 0.78-50 ng/mL 人孕激素誘導(dǎo)阻斷因子1（PIBF1 ）ELISA試劑盒

HBI霍亂弧菌生化鑒定條(SN)  5條/盒

200 mL 人白分離液1.078 Cell Separation Solution -20℃保存菌種培養(yǎng)基      進(jìn)口、國產(chǎn)Strain Medium(for B.Cereus)用于四環(huán)素檢定中蠟樣芽孢桿菌的培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))250

2 ug pDK46 pDK46 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人血清對氧磷/芳基酯3(PON3)ELISA試劑盒

5g 瑞氏色素 Wright Stain 室溫保存 0.156-10 ng/mL 人乙酰乳酸合樣蛋白(Acetolactate synthase-like protein)ELISA試劑盒

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。