我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌；部分產品現貨，超低比價，貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。

商品屬性：

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大鼠 GSTZ1 基因全長ORF克隆

大鼠 FTO 基因全長ORF克隆

大鼠 ZFP330 基因全長ORF克隆

大鼠 LAPTM5 基因全長ORF克隆

大鼠 FKBP10 基因全長ORF克隆

大鼠 DCAF11 基因全長ORF克隆

大鼠 PLA2G15 基因全長ORF克隆

大鼠 CPT1B 基因全長ORF克隆

大鼠 SERF2 基因全長ORF克隆

大鼠 ADCK3 基因全長ORF克隆

BxPC-3 (原位胰腺腺癌細胞) 1瓶 L Wnt-3A株 L Wnt-3A 低溫運輸和保存M17瓊脂進口、國產M17 Agar用于牛奶和乳制品中乳酸菌檢測和分離培養(yǎng)(Merck方法)250

去氧膽酸鈉 Desoxycholate Salt 100g2216E瓊脂進口、國產2216E　Agar用于海生細菌的培養(yǎng)和計數250

甲苯胺藍-DNA瓊脂 Toluidine Blue DNAse Agar 100 0.312-20 ng/mL 人葡糖神經酰胺(Glucosylceramidase)ELISA試劑盒

5mL 骨骼肌生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

培養(yǎng)基C(EP標準)  250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Prothymosin alpha

30次 一站式長效期SDS-PAGE電泳套裝 （適合30 kD以上蛋白） One-Stop Stable SDS-PAGE  Pack 4℃保存（上樣緩沖液需要-20℃保存） 15.6-1000 pg/ml 人白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒

2 ug pUC 119 pUC 119 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人心磷脂合成(CRLS1)ELISA試劑盒

1瓶 ME(Me)株 ME(Me) 低溫運輸和保存 1.56-100 ng/mL 人胸苷化(TP)ELISA試劑盒

48管 DTT，免稱量蛋白級 Weighting-free DTT -20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Matrix metalloproteinase-19

50T 大腸桿菌PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA試劑盒

100次 真細菌種屬鑒定 PCR Mix 2（rDNA） Bacterial DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人釋放激素受體(GnRHR)ELISA試劑盒

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。