細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

大鼠 GDI1 基因全長ORF克隆

大鼠 VPS36 基因全長ORF克隆

大鼠 LRRC57 基因全長ORF克隆

大鼠 SIRT2 基因全長ORF克隆

大鼠 PLSCR4 基因全長ORF克隆

大鼠 LECT1 基因全長ORF克隆

大鼠 ARF2 基因全長ORF克隆

大鼠 TUBB3 基因全長ORF克隆

大鼠 TTC9C 基因全長ORF克隆

大鼠 RFC5 基因全長ORF克隆

BRL (大鼠肝細胞)1瓶 A-431株 A-431 低溫運輸和保存 1.56-100 ng/mL 甘露糖(Mannose)ELISA試劑盒

25g 乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺 EDAC     -20℃保存

2 ug pGL4.28[luc2CP/minP/Hygro] pGL4.28[luc2CP/minP/Hygro] 低溫運輸，-20℃保存乙酰胺瓊脂   進口、國產Acetamide Agar用于綠膿桿菌的選擇性分離培養(yǎng)（GB標準）250

50只 專用離心管 (配研磨杵用)   常溫 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor

50T 普氏立克次體PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 20

100g 丙烯酰胺 Acrylamide 密封陰涼保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Interleukin-8

2 ug pAc5.1B-EGFP pAc5.1B-EGFP 低溫運輸，-20℃保存 156-10000 U/mL 人白激受體(LTK)ELISA試劑盒

100µg 人基因組DNA，女性 Human Genomic DNA 4℃保存 0.78-50 ng/mL 人轉錄因子21(TCF-21)ELISA試劑盒

50T 人黏附分子CD44基因PCRPCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存萘啶酮酸進口、國產每支添加于225ml HB4150、HB4192中（SN、GB標準）10mg/支*5

1瓶 F9株 F9 低溫運輸和保存

2 ug pINIIIompA pINIIIompA 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人白介素36A(IL-36A)ELISA試劑盒